Содержание к диссертации
Стр.
Список основных сокращений 5
ВВЕДЕНИЕ 6
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ГЛАВА 1. БАКТЕРИОФАГИ: СВОЙСТВА, ПЕРСПЕКТИВЫ
ПРИМЕНЕНИЯ И ПРОИЗВОДСТВА 11
Бактериофаги. Историография, распространение в природе, морфология, химический состав 11
Взаимодействия фага с бактериальной клеткой 16
Особенности бактериофагов: физико-химические и антигенные свойства 21
Устойчивость фагов к факторам воздействия 23
Применение бактериофагов 24
Препараты бактериофагов. Лекарственные формы 34
Выводы по главе 1 39
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 41
2.1. Материалы исследования 41
Объекты исследования 41
Характеристика вспомогательных веществ 43
Другие активные ингредиенты 44
Тестируемые вещества при проведении биологических испытаний 44
2.1.5 Подопытные животные 46
2.2. Методы исследования 46
2.2.1. Технологические свойства порошков, гранулята и
таблеток 46
Оценка функциональной активности препаратов бактериофагов 48
Биологические испытания 50
ГЛАВА 3. РАЗРАБОТКА СОСТАВА, ТЕХНОЛОГИИ И
СТАНДАРТИЗАЦИЯ ЖЕЛУДОЧНОРЕЗИСТЕНТНЫХ
ТАБЛЕТОК СЕКСТАФАГ БЕЗ ОБОЛОЧКИ 54
3.1. Разработка состава таблеток Секстафаг 54
Изучение стабильности секстафага при высушивании 54
Изучение влияния вспомогательных веществ на литическую активность компонентов секстафага 58
Подбор оптимальной композиции таблеток Секстафаг... 63
3.2. Оптимизация технологических параметров 75
Подбор вида таблетирования 76
Исследование влияния вида сушки на технологические свойства гранулята и стабильность компонентов секстафага 79
Влияние технологических факторов на литическую активность и желудочную резистентность таблеток Секстафаг 88
3.3. Стандартизация желудочно-резистентных таблеток
Секстафаг без оболочки 101
Технологическая стандартизация 101
Биологичские испытания 103
Биофармацевтические исследования стабильности желудочнорезистентных таблеток Секстафаг 103
3.4. Изучение стабильности таблеток Секстафаг при
различных условиях хранения 105
Алгоритм разработки рационального состава и технологии таблетированных бактериофагов 111
Выводы по главе 3 115
ГЛАВА 4. изучЕНИЕ ОСТРОЙ ТОКСИЧНОСТИ И
ФАРМАКОКИНЕТИКИ ТАБЛЕТОК СЕКСТАФАГ 116
Изучение острой токсичности 116
Изучение фармакокинетики таблетированного и жидкого коммерческого препаратов Секстафаг при пероральном приёме 123
Выводы по главе 4 126
ОБЩИЕ ВЫВОДЫ 128
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 130
ПРИЛОЖЕНИЯ 152
СПИСОК ОСНОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ
БФ - бактериофаг
ВВ - вспомогательные вещества
ГФ - государственная фармакопея
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
НД - нормативная документация
НК - нуклеиновая кислота
Коли - бактериофаг кишечной палочки
Клебс. - бактериофаг клебсиеллезный
МИБП - медицинские иммунобиологические препараты
МКЦ - микрокристаллическая целлюлоза
МЦ - метилцеллюлоза
Прот. - бактериофаг протейный
РНК - рибонуклеиновая кислота
Синегн. - бактериофаг синегной палочки
Стаф. - бактериофаг стафилококковый
Стрепт. - бактериофаг стрептококковый
СФ - секстафаг
ФСП - фармакопейная статья предприятия
Na КМЦ - натрий карбоксиметилцеллюлоза
Введение к работе
Актуальность темы
Лечение заболеваний инфекционной природы является одной из центральных задач современной медицины и представляет существенную проблему как с клинических, так и с эпидемиологических позиций. К числу наиболее часто встречающихся заболеваний относятся инфекции, вызванные условно патогенными микроорганизмами, в том числе Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus spp., Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Streptococcus spp. Традиционными препаратами этиотропной терапии гнойно-воспалительных заболеваний являются антибиотики. Однако применение антибиотиков сопряжено не только с гибелью патогенных агентов, поддерживающих инфекционный процесс, но и с нарушением жизнедеятельности организма - поражение органов и функциональных систем [78, 146]. Вопрос об успешной профилактике и терапии гнойно-септических инфекций приобретает чрезвычайную актуальность в условиях формирования полирезистентности микроорганизмов к антибиотикам [23, 49, 67, 70, 188]. В связи с этим интенсифицируются исследования по совершенствованию и разработке альтернативных методов лечения, в том числе и фаготерапии [4, 168]. Основными достоинствами препаратов бактериофагов являются: высокая чувствительность к ним патогенной микрофлоры, сочетаемость со всеми видами традиционной антибактериальной терапии, отсутствие противопоказаний к применению [46, 79, 143].
Распространенными формами выпуска препаратов бактериофагов являются жидкие лекарственные формы и таблетированные с кислотоустойчивой оболочкой. Известны желудочно-резистентные (кишечно-растворимые) таблетки бактериофагов без оболочки с пектиновой защитой, пригодные только для стабильных видов монобактериофагов
кишечной группы (дизентерийный, брюшнотифозный и сальмонеллезный) [57].
В условиях смешанных инфекций, вызванных условно патогенными микроорганизмами, наиболее целесообразна и актуальна разработка лекарственных форм на основе поливалентных комплексных бактериофагов [19,119,154].
Цель и задачи исследования. Целью работы явилось создание таблеток комплексного препарата Секстафаг (Пиобактериофаг поливалентный).
Для реализации поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
Изучить влияние вспомогательных веществ и технологических режимов на стабильность компонентов препарата Секстафаг.
Разработать рациональный состав, технологию и оптимизировать технологические параметры желудочно-резистентных таблеток Секстафаг (Пиобактериофаг поливалентный) - далее таблетки Секстафаг.
Провести стандартизацию разработанных таблеток комплексного препарата Секстафаг.
Изучить стабильность разработанного таблетированного Секстафага при различных условиях хранения.
В модельных опытах на белых мышах оценить острую токсичность и фармакокинетику таблеток Секстафаг.
Разработать и оформить нормативную документацию - проект ФСП и лабораторный регламент на таблетки Секстафаг (Пиобактериофаг поливалентный).
Научная новизна работы. Впервые разработан оригинальный состав и технология желудочно-резистентных таблеток без оболочки комплексного препарата Секстафаг.
Определены оптимальные технологические параметры производства таблетированной лекарственной формы секстафага, обеспечивающие высокие показатели фармацевтической доступности. Изучены сохранение литической активности сухого остатка жидкого, маточного и концентрированного секстафага в процессе хранения и стабильность таблетированного препарата при различных температурных режимах.
Исследования «in vitro» показали, что таблетированный секстафаг обладает большей кислотоустойчивостью в желудочном соке, чем жидкий препарат. Результаты изучения фармакокинетики жидкого и таблетированного препаратов Секстафаг при пероральном пути введения выявили преимущества таблетированной лекарственной формы.
В эксперименте на животных установлено, что таблетки Секстафаг не токсичны.
Практическая значимость. Полученные данные расширяют представления о методологических подходах к конструированию фаговых препаратов. На основании разработанного состава и технологии желудочно-резистентных таблеток Секстафаг без оболочки на базе лаборатории биорегуляторов ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ «Пермское НПО «Биомед» (далее НПО «Биомед») в соответствии с лабораторным регламентом (утвержден 20 февраля 2009 г.) проведена апробация технологии получения таблеток Секстафаг. В экспериментально-производственных условиях получены три серии таблеток количество каждой серии по 800 штук (акт апробации от 20 марта 2009 г.). В отделении биологического и технологического контроля НПО «Биомед» проведен контроль качества полученных серий препарата согласно проекту ФСП. Установлено полное соответствие показателей качества кишечно-
растворимых таблеток Секстафаг требованиям проекта ФСП Секстафаг таблетки. Установлена рациональность и воспроизводимость предложенной технологии и возможность её использования в промышленных условиях.
Положения, выносимые на защиту.
Изучение влияния вспомогательных веществ на стабильность компонентов секстафага в исходном состоянии и при вакуумном высушивании.
Результаты теоретического и экспериментального обоснования состава и технологии препарата Секстафаг - желудочно-резистентные таблетки без оболочки.
Оптимизация технологических параметров производства таблетированного секстафага.
Результаты изучения влияния температуры хранения таблетированного секстафага на стабильность его компонентов.
Результаты исследования острой токсичности и фармакокинетики таблеток Секстафаг.
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на Российской научно-практической конференции «Достижения и перспективы в области создания новых лекарственных средств» (Пермь, 2007); XV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2008); Российской научно-практической конференции «Фармация и общественное здоровье» (Екатеринбург, 2008); Всероссийской научно-практической конференции «Создание и перспективы применения медицинских иммунобиологических препаратов» (Пермь, 2008); Российской научно-практической конференции «Современное состояние и пути оптимизации лекарственного обеспечения населения» (Пермь, 2008);
на заседаниях ученого совета и производственных совещаниях ФГУП «НПО Микроген» МЗ РФ «Пермское НПО «Биомед» (2007-2009г.г.).
Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию», (номер государственной регистрации: 01.9.50 007426).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 9 научных работ, в том числе 2 публикации в журналах, рекомендуемых ВАК.
Личное участие автора. Все приведенные в диссертации данные получены при личном участии автора как на этапе постановки задач и разработки методических подходов к их выполнению, так и при наборе первичных фактических данных, статистической обработке и анализе полученных результатов, написании и оформлении публикаций.
Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 151 странице компьютерного текста, содержит 28 таблиц и 24 рисунка. Работа состоит из введения, обзора литературы, главы, посвященной материалам и методам исследования, двух глав эспериментальных исследований, выводов, списка использованной литературы и приложения. Библиографический указатель включает 197 источников, из которых 24 иностранных.
