Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 9
1.1 Эндопаразитофауна и ущерб, наносимый ею свиноводству 9
1.2 Структура паразитоценозов 12
1.3 Биотические взаимоотношения в паразитарной системе 14
1.4 Теоретическое обоснование и видовая специфичность системы «хозяин-паразит» 20
1.5 Гельминтофаунистические комплексы Sus scrofa 26
1.6 Экологическая обоснованность распространения основных немато-дозов свиней 35
1.7 Состав и свойства микрофлоры кишечника в норме и на фоне инвазии 3 8
ГЛАВА 2. Материалы и методы 45
2.1 Краткая характеристика природно-климатических условий
Ульяновской области 45
2.2 Методы изучения гельминтофауны 49
2.2.1 Оценка плодовитости нематод в организме свиней 50
2.2.2 Культивирование личинок стронгилоид in vivo 51
2.2.3 Цикл развития S. ransomi in vivo и in vitro 52
2.2.4 Выживаемость личинок Strongyloides ransomi 52
2.3 Исследование количественного и качественного состава
микрофлоры желудочно-кишечного тракта свиней в норме
и на фоне инвазии 54
2.4 Прогнозирование эпизоотической ситуации нематодозов 58
2.5 Оценка ущерба, наносимого гельминтозами свиноводству 59
2.6 Оценка эффективности препарата «Иверсект» 61
ГЛАВА 3. Результаты собственных исследований 63
3.1 Региональная специфика видового многообразия эндопаразитофауны Sus scrofa Ульяновской области - 63
3.2 Структура и доминантные виды нематодофауны Sus scrofa 65
3.3 Возрастная динамика экстенсивности и интенсивности инвазии 69
3.4 Сезонная динамика зараженности свиней нематодофауной 77
3.5 Жизнеспособность паразитофауны in vitro и in vivo 80
3.5.1 Культивирование S. ransomi в лабораторных условиях 81
3.5.2 Развитие Strongyloides ransomi во внешней среде 82
3.5.3 Выживаемость личинок Strongyloides ransomi 85
3.6 Микрофлора кишечника Sus scrofa в норме и на фоне инвазии 88
3.6.1 Состав микрофлоры кишечника здоровых животных 89
3.6.2 Микрофлора кишечника на фоне инвазии 97
3.7 Экологическое прогнозирование распространения основных нематод озов свиней 103
3.8 Оценка экономического ущерба, наносимого нематодозами свиноводству 105
3.9 Оценка эффективности использования препарата «Иверсект» и экономической эффективности ветеринарных мероприятий при нематодозах 116
Заключение 119
Выводы 132
Библиографический список
- Структура паразитоценозов
- Экологическая обоснованность распространения основных немато-дозов свиней
- Культивирование личинок стронгилоид in vivo
- Возрастная динамика экстенсивности и интенсивности инвазии
Введение к работе
Диссертационная работа выполнялась в соответствии с планом НИР ФГОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия» по теме «Система агроэкологического мониторинга и санитарного прогнозирования», № государственной регистрации 01.200.203527 с 2002 по 2006 г.
По характеру изучаемых процессов и явлений диссертационная работа относится к области биоресурсов, поскольку направлена на решение проблемы повышения потенциала продуктивности отрасли свиноводства. Диссертационное исследование в равной мере относится и к области экологии, поскольку, в теоретическом плане, оно посвящено исследованию механизмов взаимодействий организма - хозяина, паразитоценоза и микробиоценоза кишечника на фоне инвазии, а в практическом - решает проблему оздоровления животных для повышения их потенциала продуктивности и повышения уровня биобезопасности окружающей среды.
Актуальность темы. Решение важной народнохозяйственной проблемы повышения продуктивности сельскохозяйственных животных определяется не только уровнем их генетического потенциала, но и на 70% зависит от экологических факторов внешней среды. В условиях сельскохозяйственного производства биобезопасность среды при производстве продукции имеет решающее значение.
Ульяновская область относится к территориям с высоким уровнем биологической опасности, обусловленной повсеместным распространением широкого спектра эндопаразитов среди сельскохозяйственных и плотоядных животных. Для аграрных районов области характерен высокий уровень паразитарной обсемененности почв (Романова Е.М. и др., 2004). В свиноводстве области уровень зараженности животных эндопаразитофауной за последнее десятилетие не опускался ниже 70% (Камалетдинова Г.М., Романова Е.М., 1999). На территории Ульяновской области все свинокомплексы
5 заражены гельминтофауной. На фоне заражения гельминтофауной биоресурсный потенциал отрасли снижается на 30-35%.
Биологические особенности свиней (Sus scrofa) и особенности технологических циклов в свиноводстве способствуют сохранению высокого уровня зараженности животных гельминтофауной. Помимо ущерба, наносимого потенциалу продуктивности свиноводства, наносится большой экологический ущерб за счет гельминтообсемененности почв на территориях аграрных комплексов и сопредельных территориях, при внесении в почву навоза. Это порождает пульсирующие очаги высокого уровня биологической опасности, где вероятность заражения антропозоонозами человека и других животных, в том числе и плотоядных, как звена, осуществляющего перенос и распространение гельминтофауны, очень высока.
Эволюция паразитарных систем превратила их в устойчивые саморегулирующиеся природные структуры с широким диапазоном экологической валентности (Догель В.А., 1962; Наумов Н.П., 1963; Вернадский В.И., 1967; Кеннеди К., 1978; Одум Ю., 1986; Мазурмович Б.Н., 1988; Белов СВ., 1991; Вронский В.А., 1996). Видовое многообразие гельминтофауны, огромная плодовитость, высокая численность, особенности биологических циклов развития, включающие миграцию в организме хозяев, адаптационная пластичность, - все это идеально вписывается в технологические условия производства свинины и наносит выраженный ущерб биологическим ресурсам свиноводства Ульяновской области. Масштаб существующей проблемы и ее актуальность требуют пристального
Цель работы. Выявить видовое многообразие гельминтофауны свиней, исследовать характер ее биотических взаимоотношений с микробиоценозом кишечника и экологическую пластичность на разных стадиях онтогенеза; оценить ущерб, наносимый биоресурсному потенциалу свиноводства и разработать мероприятия по снижению уровня зараженности.
В задачи исследований входило:
Ш Исследовать видовое многообразие, охарактеризовать структуру и выявить доминантные виды гельминтофауны Sus scrofa в Ульяновской области.
В Изучить возрастную, сезонную динамику, репродуктивный потенциал, выживаемость и экологическую пластичность основного представителя гельминтофауны свиней - Strongyloides ransomi (S. ransomi).
Ш Исследовать микробиоценозы кишечника Sus scrofa в норме и на фоне инвазии и оценить характер биотических взаимоотношений гельминтофауны и видового состава микрофлоры.
Ш Сформировать текущий и перспективный экологический прогноз паразитарного загрязнения территории и дать оценку уровня их биологической опасности.
Ш Оценить экономический ущерб, наносимый свиноводству эндопаразитофауной и провести апробацию препарата «Иверсект» при смешанной инвазии.
На защиту выносятся следующие положения:
Ш Видовое многообразие гельминтофауны, снижающей биоресурсный потенциал свиноводства Ульяновской области представлено 4 классами: Trematoda (Opistorchis felineus), Cestoda (Cysticercus cellulosae, Echinicoccus granulosus), Acanthocephala (Macracanthorynchus hirudinaceus), Nematoda (Strongyloides ransomi, Ascaris suum, Trichocephalus suis, Oesophagostomum dentatum, Physocephalus sexalatus). Доминирующим является класс Nematoda и его представитель Strongyloides ransomi.
ї В норме и на фоне инвазии сохраняется постоянство видового состава микробиоценоза кишечника, но происходит перераспределение численности его компонентов: резко снижается количество основной микрофлоры бифидобактерий и бактероидов на фоне возрастания доли сопутствующей и остаточной микрофлоры. Биотические взаимоотношения гельминтофауны и бифидобактерий характеризуются явным антагонизмом. Взаимоотношения
7 гельминтофауны с сопутствующей и остаточной микрофлорой кишечника характеризуются как мутуализм.
Гельминтозы снижают биоресурсный потенциал свиноводства Ульяновской области в среднем на 30%; недополучение ежегодной продукции от прироста живой массы молодняка на условную голову составляет 3887 руб. в год; недополучение приплода - 3,67 условных голов на одну основную свиноматку. Антгельминтик «Иверсект» обеспечил 100% обеззараживание в течение 5 суток.
На территории Ульяновской области выявлены районы, с высоким уровнем паразитарного загрязнения, проведено их картографирование, выделены территории 1, 2 и 3 класса биологической опасности, дан текущий и перспективный прогноз развития экологической ситуации. .
Научная новизна. Охарактеризовано видовое многообразие гельминтофауны Sus scrofa на территории Ульяновской области. Дана текущая и прогностическая оценка структуры и плотности популяций эндопаразитофауны S. scrofa. Изучен видовой и количественный составы микробиоценоза кишечника в норме и на фоне инвазии, исследован характер биотических взаимодействий микрофлоры и гельминтофауны. Охарактеризован адаптивный резерв и выживаемость различных стадий онтогенеза стронгилоид в разных экологических условиях. Дан текущий и перспективный экологический прогноз развития инвазии. Охарактеризована годовая и сезонная динамика экстенсивности и интенсивности инвазии разных видов гельминтофауны в свиноводстве Ульяновской области. Расчитан экономический ущерб, наносимый свиноводству спектром моно- и полиинвазий, распространенных в Ульяновской области. Дана высокая позитивная оценка эффективности антгельминт-ного препарата «Иверсект» в борьбе с нематодофауной S. scrofa.
Практическая ценность работы. На карте территорий Ульяновской области выделены районы повышенной биологической опасности зон распространения гельминтофауны. Выделены районы с высоким уровнем заболеваемости, средним и низким. Дана прогностическая оценка по ожидаемому
8 повышению уровня гельминтозагрязненности территорий. Результаты исследований переданы в администрацию области.
Результаты диссертационной работы могут быть рекомендованы к широкому внедрению в свиноводстве области при борьбе с инвазионными заболеваниями для повышения потенциала продуктивности отрасли.
Результаты исследований используются в учебном процессе на факультете ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия» по курсу «Паразитология и инвазионные болезни животных».
Апробация результатов. Материалы диссертационной работы были доложены и обсуждались на научно-практических семинарах и конференциях разного уровня: на ежемесячных научных семинарах кафедры, ежегодных конференциях молодых ученых Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии 2003-2006 гг., на Всероссийских научно-практических конференциях молодых ученых «Региональные проблемы народного хозяйства» (Ульяновск, 2004), «Современное развитие АПК: региональный опыт, проблемы, перспективы» (Ульяновск, 2005), на научно-практических конференциях международного и всероссийского уровня: Новосибирск (2004), Уфа (2006).
Публикации. По материалам исследований опубликовано 6 статей. В них изложены основные положения и выводы диссертационной работы.
Структура паразитоценозов
В иерархической структуре эколого-паразитарной системы различают синпаразитарную экосистему и микропаразитоценоз.
Под синпаразитарной экосистемой А.П. Маркевич (1973, 1975), предложил понимать совокупность интегрированных многовидовых комплексов как паразитов, так и условно-патогенных организмов, обитающих не только в организме животных, но и в открытой природе на разных стадиях развития вместе с дефинитивными, промежуточными, резервуарными хозяевами, а также механическими переносчиками инфекционного и инвазионного начала.
В состав этой системы включены две подсистемы: паразитоценоз и паразитоценогеннная гемисистема.
Паразитоценоз, по определению Е.Н. Павловского (1965, 1966), есть вся совокупность населения (микрофлоры, микрофауны и вирусов) живого организма по его органам и частям тела. Паразитоценогенная гемисистема объединяет природные популяции всех свободноживущих поколений паразитов.
Микропаразитоценоз - это открытая, автономная, постоянно меняющаяся во времени, неустойчивая, с кооперативным эффектом группировка экологически связанных паразитических организмов, принадлежащих к разным таксонам внутри или на покровах одного из них, именуемого хозяином (108,117).
Локализации паразитов, как известно, может быть самой разнообразной: наружной (эктопаразиты) и внутренней (эндопаразиты), постоянной (облигатной) и временной (факультативной). В свою очередь, эндопаразиты могут локализоваться в открытых и закрытых полостях, в тканях и органах; они могут находиться внутри клеток и даже на молекулярном уровне, как, например, некоторые генетические вирусы. Исходя из этого, в организме паразитов могут создаваться соответствующие комбинации паразитов на разных уровнях (9,15, 19,28, 36, 38, 60, 64, 72, 83, 92, 95, 105, 121, 146, 158, 179, 197,205): 1. На организменном уровне: когда паразиты являются многоклеточными организмами. Например, при смешанном паразитировании различных видов гельминтов, гельминтов и членистоногих. 2. На клеточном уровне: когда паразиты (сочлены паразитоценоза) являются одноклеточными организмами. Например, при инвазии простейшими и бактериями, или их различными комбинациями. 3. На генетическом (молекулярном) уровне, что чаще наблюдается при вирусных инфекциях. 4. На комбинированном уровне: при различных сочетаниях вышеуказанных уровней.
Микропаразитоценозы, так же как и болезни, можно классифицировать как простые и сложные. Простыми микропаразитоценозами именуют сочетания паразитов на одном из указанных выше уровней, а сложными 14 при различных сочетаниях, то есть многовидовых, на разных уровнях (52, 53, 71,82,84,86, 114,116,129, 137,143,156,187,209).
По количеству сочленов микропаразитоценозы следует различать: 1. двухчленные (диксенные) - состоящие из двух видов паразитов, независимо от того, к какому миру они принадлежат - животному или растительному; 2. трехчленные (триксенные) - состоящие из трех видов, относящихся к различным таксонам; 3. многочленные (поликсенные) - состоящие из более чем трех видов паразитов; 4. многочленные по типу аллобиофории - наблюдаются в тех случаях, когда паразитические организмы находятся внутри других паразитов. Например, в полости и органах свиного аскариса локализуются пять видов бактерий и т.д.
Биотические взаимоотношения в паразитарной системе Е.Н. Павловский (1965, 1966) указывал, что между сочленами парази-тоценоза устанавливаются сложные взаимоотношения, проявляющиеся как синергетические, в других случаях конкурентные или антагонистические.
В открытой природе различают пять основных типов взаимодействия между организмами: антагонизм, синергизм, нейтрализм, аменсализм, комменсализм (табл. 1). Антагонизм (антибиоз) или интерференция. Это отрицательные конкурентные взаимоотношения между видами паразитоценоза. Частными случаями конкуренции являются (63): а) конкуренция в узком смысле слова; б) антагонизм или аллелопатическое ингибирование; в) непосредственная борьба между представителями разных видов или агрессия.
Экологическая обоснованность распространения основных немато-дозов свиней
Еще одним членом паразитоценоза свиней является свиной аскарис. Ascaris suum Goeze, 1782. Тип Nemathelmintes Schneider, 1873 Класс Nematoda Rudolphi, 1808 Подотряд Ascaridata Skrjabin, 1915 Семейство Ascaridae Baird, 1853 Род Ascaris Linnaeus, 1758 Ascaris suum Goeze, 1782 A. suum - крупная веретенообразная нематода. Тело покрыто мощной кутикулой; наружная поверхность поперечно исчерчена. Ротовое отверстие окружено тремя губами. Внутрь каждой губы проникает слой гиподермы, образуя пульпу. Края губ окружены мелкими нежными зубчиками (94, 109, 148).
Самеи. Длина тела 105,0-220,0 мм, ширина 3,0 мм. Хвост конический, сильно изогнут вентрально. Спикулы парные 1,81 мм длиной. На вентральной поверхности хвостового конца расположены многочисленные сосочки (191, 196).
Самка. Длина 300,0 мм, ширина 5,0 мм. Половой аппарат двойной; состоит из двух извитых тонких трубчатых яичников, переходящих непосредственно в две более широкого калибра трубчатые матки. Последние соединяются в короткий непарный канал - вагину, открывающуюся наружным половым отверстием - вульвой. Вульва находится на вентральной стороне тела, приблизительно на границе передней и средней третей тела. У места расположения вульвы тело имеет отчетливо заметную перетяжку. Яйца овальной формы, с толстой скорлупой, состоящей из ряда оболочек сложной структуры. Наружная оболочка яиц имеет фестончатую форму и напоминает собой тутовую ягоду. Длина яиц 0,056-0,087 мм, ширина 0,046-0,057 мм (191, 196). Источник распространения аскариоза - взрослые свиньи, своевременно не подвергшиеся дегельминтизации. Наиболее восприимчив к аскариозу молодняк в группе подсоса и молодняк в возрасте до 6-7 месяцев. Заражение происходит в основном при заглатывании яиц аскарисов с кормом или водой из загрязненных кормушек и с пола. Молодняк на подсосе заражается, слизывая с вымени и с сосков матери инвазионные яйца. В литературе есть данные о внутриутробном заражении аскариозом свиней (93, 109,148, 191,203).
В распространении аскариоза не последнюю роль играют дождевые черви, мухи, личинки жуков и другие насекомые. Дождевые черви являются резервуаром для личинок аскарисов, так как, заглатывая яйца аскарисов, у них в кишечнике происходит выход личинок аскарисов из яиц. Данные личинки долго сохраняют жизнеспособность и инвазионность (20, 34, 42, 47, 97,127, 210).
Яйца аскарисов весьма устойчивы к воздействию условий внешней среды и могут сохранять жизнеспособность более 2 лет. До 10 лет могут сохраняться в песчаной и супесчаной почвах. При низкой температуре -30С они погибают через сутки (34,42, 97).
Отмечена высокая устойчивость аскарисов к химическим веществам. Они могут развиваться в 2%-ном растворе формалина, противостоят 4-5%-ной сухой щелочи. Губительно воздействуют на яйца аскарисов горячие 3-4%-ные растворы щелочей. Горячая вода - 60С при кратковременном воздействии убивает лишь часть аскарисов (34,42,47, 97).
Огромное значение в распространении аскариоза свиней играет сезонность: весна и осень являются наиболее благоприятной порой для развития и распространения аскариоза (9, 24,44, 59, 89,94,144,148, 185,208, 249).
Цикл развития возбудителя без промежуточного хозяина, т.е. прямой. Аскарисы являются геогельминтами. На основании анализа литературных данных о биологии аскаридат обоснованы следующие четыре основных типа развития представителей под 33 отряда Ascaridata: аскаридиоидный, аскаридоидный, токсокароидный и ани-закидоидный.
Первый тип - аскаридиоидный присущ аскаридиям, паразитирующим у птиц, преимущественно куриных. Характерной особенностью настоящего типа является отсутствие миграции личинок по крови хозяина.
Второй тип - аскаридоидный присущ нематодам родов Ascaris, Parascaris. Характерной особенностью является гепато-пульмональная миграция личинок в процессе их онтогенеза, т.е. личинки способны мигрировать по кровеносным сосудам в печень, затем через сердце в легкие. Из капилляров легких личинки проникают в бронхи, трахею и ротовую полость.
Третий тип - токсокароидный характерен для нематод Тохосага и Neoascaris. При данном типе развития аскаридат инвазионные яйца попадают в пищеварительный тракт беременного животного; вышедшие из них личинки, мигрируя по кровяному руслу матери, проникают через плаценту в плод и в нем достигают половозрелого состояния вскоре после рождения.
Четвертый тип - анизакидоидный зарегистрирован среди аскаридат водных позвоночных. Данный тип развития характеризуется сменой хозяев. Инвазионные элементы вначале попадают к промежуточному или резервуар-ному хозяину, у которых они мигрируют из кишечника в ткани и органы, претерпевают личиночный метаморфоз и инкапсуляцию, а затем вместе с этими хозяевами попадают в организм дефинитивных хозяев (25, 34, 167, 191,196,206,207,216).
Культивирование личинок стронгилоид in vivo
Полученные цифровые данные обрабатывали статистически по методу Стьюдента и с использованием электронной таблицы Microsoft Ecxel 8.0 for Windows 98.
Родовую и видовую идентификацию выделенных культур бактерий проводили в соответствии с общепринятыми тестами и дифференциальными схемами путем изучения морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических свойств.
При изучении культуральных свойств выделенных культур микроорганизмов учитывали характер роста на питательных средах. На плотных средах - вид, форму, величину, края, поверхность, цвет и консистенцию колоний, а в жидких средах - степень прозрачности жидкости, наличие или отсутствие осадка и его характер.
Морфологические и тинкториальные свойства выделенных культур изучали в мазках, окрашенных по Граму.
К мясной воде прибавляют 1% раствор пептона и 0,5% раствор хлорида натрия, кипятят при помешивании. После растворения пептона устанавливают рН 20%-ным раствором едкого натра с учетом того, что среда становится после стерилизации более кислой. Например, для получения в готовом бульоне рН 7,5-7,6 надо до стерилизации установить рН не ниже 8,0. Если бульон предназначается для приготовления сахарного бульона или плотной среды (агара) следует установить первоначальный рН не ниже 8,2-8,4. Для стабилизации рН рекомендуется к бульону добавлять фосфатные буферные смеси. Кипятят бульон на огне 30-40 минут в сосуде, закрытом крышкой. Отмечают уровень бульона и при вскипании приливают дистиллированную воду до первоначального объема. Можно сразу прилить 10% дистиллированной воды на вскипание. После окончательного установления реакции кипятят бульон вторично.
К МПБ добавляют 2-3% промытого мелко нарезанного агар-агара, нагревают до расплавления агара, доводят до кипения, в горячем виде проверяют рН, затем, если необходимо, доводят его до нужного значения (7,2-7,6), фильтруют через ватно-марлевый фильтр. Профильтрованный горячий агар разливают по пробиркам и колбам, стерилизуют автоклавированием при 1 атм. 20-30 мин. Чтобы получить скошенную поверхность агара, удобную для посева, после стерилизации пробирки с расплавленным МПА оставляют при комнатной температуре до уплотнения в наклонном положении (конец с пробкой приподнят). Используют культивирование микроорганизмов на плотных питательных средах в чашках Петри.
В качестве субстрата среда содержит лактозу и предназначена для дифференциации бактерий, различающихся по способности расщеплять лактозу.
К 1000 мл расплавленного МПА (рН 7,4) температурой 70С добавляют 1 г химически чистой лактозы, предварительно растворенной в стерильной пробирке в небольшом количестве прокипяченной дистиллированной воды.
В отдельных пробирках готовят: 1) 2-3 мл спиртового насыщенного раствора основного фуксина; 2) 10 мл 10%-ного раствора сульфида натрия (Na2S03).
В стерильную пробирку отмеривают 1 мл раствора фуксина и добавляют раствор сульфида натрия до обесцвечивания фуксина. Приготовленную смесь вливают в растопленный агар, хорошо перемешивают (избегать образования пены) и разливают по чашкам Петри. Готовая среда бесцветна. При росте кишечная полочка дает колонии красноватый цвет с металлическим блеском, сальмонеллы и шигеллы - бесцветные.
Многие виды болезнетворных бактерий плохо растут на общеупотребительных питательных средах, поэтому в основные среды добавляют кровь, сыворотку крови, углеводы и т.д. Такие среды получили название обогащенных.
Сывороточный и кровяной агары: к расплавленному и охлажденному до 45-50С стерильному питательному агару добавляют 5-10% стерильной дефибринированной крови барана (кролика) или сыворотки крови (лошади, крупного рогатого скота, кролика). Для получения дефибринированной кро 58 ви у барана кровь берут асептично из яремной вены стерильной иглой в стерильный флакон со стеклянными бусинами или шариками, встряхивают вращательными движениями 15-20 мин, чтобы предотвратить свертывание крови. Фибрин остается на бусинах.
Компоненты перемешивают, разливают в чашки Петри, пробирки и оставляют до застывания питательной среды.
Растворы углеводов (глюкоза и др.) стерилизуют текучим паром или фильтрованием и добавляют в количестве 0,5-1% к питательной среде.
Предназначен для выделения сальмонелл, содержит лактозу в качестве субстрата и компоненты, подавляющие рост сопутствующей микрофлоры. В состав кроме питательной агаровой среды входят: желчные соли, цитрат натрия, тиосульфат натрия, фосфат натрия, бриллиантовый зеленый, кальцинированная сода, йод, хлорид натрия, лактоза, нейтральный красный. Навеску порошка растворяют в воде, кипятят и разливают в чашки Петри. Готовая среда прозрачная или розоватая. Колонии сальмонелл бесцветные, эшерихий - брусничного цвета.
Возрастная динамика экстенсивности и интенсивности инвазии
На данном этапе работы мы культивировали яйца S. ransomi в лабораторных условиях до инвазионной личинки (в термостате) и во внешней среде. Важно было установить не только температурный оптимум, обеспечивающий развитие, но и выявить, как температура влияет на скорость протекания отдельных стадий онтогенеза S. ransomi. В ходе исследований параллельно анализировались ростовые характеристики личинок разных стадий прямого и непрямого путей развития S. ransomi.
В ходе исследований нами было установлено, что при температуре 8С личинки S. ransomi не развиваются и не выходят из яиц. При повышении температуры до 12С через 16,9±0,72 часа отмечался выход личинок из яйцевых оболочек. Процесс выхода личинок из яиц (вылупление) при повышении температуры до 36С резко ускорился и составил 2,3±0,02 часа (различия достоверны, td=20,28, р 0,001) (рис. 18).
Влияние температуры культивирования на продолжительность выхода и созревание личинок S. ransomi (1, 2, 3 стадий) Развитие личинок S. ransomi 1 стадии при температуре 36С завершилось за 6,2±0,05 час. При температуре 12С личинка завершила первую стадию развития за 46,2±0,41 часа (различия достоверны, =97,56, р 0,001).
На развитие личинок 2 стадии также сильно влияла температура среды. При температуре 36С 2 стадия развития личинок завершалась за 3,4±0,03 часа, но при этом нарастал процент гибели яиц за счет перегрева. При понижении температуры до 12С развитие личинок 2 стадии резко замедлялось и завершалось за 69,4±0,54 часа (различия достоверны, td=l22,22, р 0,001).
Развитие личинок 3 стадии также сильно зависело от температуры: наиболее высокий темп развития наблюдался при температуре 36С, в этом температурном режиме третья стадия завершалась за 7,6±0,06 часа, но и процент гибели был высоким.
Согласно результатам исследования, развитие S. ransomi от выхода личинки из яйца до половозрелого состояния при различных температурных режимах проходит с разной скоростью. С увеличением температуры скорость развития нарастает и одновременно повышается процент гибели личинок. Температурный оптимум, обеспечивавший развитие и выживание личинок, находится на уровне 20-28С.
Попытки культивирования яиц при температуре 8С не увенчались успехом, поскольку личинки при этой температуре не покидали яйцевых оболочек: они пребывали в состоянии анабиоза. При температуре культивирования выше 40С яйца стронгилоид коагулировали.
Развитие Strongyloides ransomi во внешней среде Развитие & ransomi во внешней среде проходит двумя путями: прямым и непрямым. При прямом пути развития (преимущественно в теплое время года) вышедшие из яиц рабдитовидные личинки (с двумя расширениями на коротком пищеводе) двукратно линяют и через 2-3 суток при температуре 20-3 0С становятся инвазионными. При непрямом пути развития (с ноября по март) после первой линьки рабдитовидных личинок 1 стадии формируются личинки 2 стадии, которые превращаются в свободноживущих раздельнополых стронгилоид. Самки во внешней среде (в навозе) откладывают яйца, из них выходят личинки, которые способны развиваться в свободноживущих самцов и самок.
В ходе наблюдений нами установлено, что прямой и непрямой циклы в большинстве случаев происходят одновременно. При культивировании яиц во внешней среде через 20-34 часа при микроскопировании были выявлены филяриевидные личинки S. ransomi. Повторная микроскопия через 72 часа также выявила в пробах инвазионные личинки.
Изучение прямого пути развития S. ransomi во внешней среде проводили на культуре, полученной по методу Т.Н. Поповой (121). Для улучшения аэрации ежедневно культуральную массу перемешивали и по мере подсыхания добавляли в нее воду.
Полученные нами результаты хорошо согласуются с данными ряда авторов (77, 130, 140) о том, что личинки стронгилоид при температуре +30С становятся инвазионными через 38 часов, а при температуре +12-16С срок развития затягивается до 4 суток. При температуре +8С, по результатам собственных исследований и по данным литературных источников, личинки не покидают яйцевых оболочек. При понижении температуры до 0С яйца гибнут в течение суток.
При температуре окружающей среды - 20-25С из яиц через 5-15 ч выходят личинки. При прямом типе развития личинки проходят 3 стадии линек и через 2-3 дня превращаются в филяриевидную (инвазионную) личинку, способную вызвать заражение животных. Параллельно, помимо развития, изучался рост личинок (рис. 19). Известно, что самки стронгилоид откладывают яйца с уже развитой личинкой. Яйца стронгилоид имеют эллиптическую форму, в длину достигают 0,051-0,056 мм, в ширину - 0,030-0,033 мм.
