Содержание к диссертации
Введение
1 Обзор литературы
1.1 Характеристика состава и свойств нуклеопротеидов, входящих в состав гонад гидробионтов 12
1.2 Биологическая активность компонентов нуклеопротеидов 18
1.3 Характеристика эндогенных ферментов в мужских гонадах гидробионтов 28
1.4 Способы получения белковых гидролизатов 33
1.5 Ферментные комплексы, используемые для получения гидролизатов экспериментальная часть
2. Объекты, материалы и методы исследований 49
2.1 Объекты и материалы исследований 49
2.2 Методы исследований 49
3 Результаты и их обсуждение
3.1 Характеристика сырья по содержанию ДНК, активности эндогенных ферментов 60
3.1.1 Оценка сырья по содержанию ДНК 60
3.1.2 Исследование активности протеолитических ферментов в гонадах гидробионтов 61
3.1.3 Исследование активности дезоксирибонуклеаз в гонадах гидробионтов 63
3.1.4 Кинетические параметры действия щелочных и кислых дезоксирибонуклеаз в гонадах гидробионтов 64
3.2 Подбор оптимальных параметров для ферментативного гидролиза нуклеопротеидных комплексов гон&д гидробионтов 69
3.2.1 Исследование параметров протеолиза исходного сырья 69
3.2.2 Исследование кинетики гидролиза нуклеиновых кислот 73
3.3 Характеристика химического состава гидролизатов из гонад гидробионтов 79
3.3.1 Белково-пептидный и аминокислотный состав 79
3.3.2 Сравнительная характеристика состава олигонуклеотидов в препаратах из молок рыб 81
3.3.2.1 Сравнение состава нуклеопротеидных комплексов и гидролизатов из молок рыб 81
3.3.2.2 Сравнительный состав гидролизатов, полученных с применением различных ферментных препаратов 83
3.3.2.3 Сравнение состава олигонуклеотидов гидролизатов молок различных видов рыб 85
3.3.2.4 Фракционный состав низкомолекулярных нуклеиновых кислот в препаратах из гонад различных видов гидробионтов 87
3.4 Технологическая схема получения БАД «Нуклеатин» 90
3.4.1 Условия ферментативного гидролиза 90
3.4.2 Разделение олигонуклеотидов методом ультрафильтрации 92
3.4.3 Обоснование возможности применения разработанного метода для гонад различных видов гидробионтов 96
3.5 Исследование медико-биологической активности препаратов из гонад гидробионтов 97
Заключение 106
Выводы 110
Список литературы
- Биологическая активность компонентов нуклеопротеидов
- Ферментные комплексы, используемые для получения гидролизатов экспериментальная часть
- Исследование активности протеолитических ферментов в гонадах гидробионтов
- Белково-пептидный и аминокислотный состав
Введение к работе
Актуальность работы. В настоящее время ДНК и ее низкомолекулярные производные являются перспективными лекарственными средствами и биологически активными пищевыми добавками (БАД). Для получения препаратов ДНК используют различные сырьевые источники: бактериальные клетки, эритроциты цыплят, тимус телят, селезенка и печень мышей и крыс, молоки сельди, карпа, осетровых и других видов рыб (Пашук и др., 1995). Препараты ДНК из молок лососевых и осетровых обладают наиболее эффективным фармакологическим действием (Патент РФ № 915446; Каплина, 2000).
Анализируя известные литературные данные, можно сделать заключение о том, что область применения ДНК зависит от ее молекулярной массы. Например, ДНК со сравнительно низкой молекулярной массой применяется в кардиологии при лечении ишемической болезни сердца (Патент РФ № 95103961), в онкологии при профилактике и лечении рака (А.С. 1804852 SU), для профилактики инфекционных заболеваний (Патент РФ № 2063228). Олигонуклеотиды, нуклеозиды и производные тимидина могут использоваться при лечении ВИЧ-инфекции (Хаитов, Игнатьева, 1992).
Основным источником получения БАД на основе ДНК являются молоки лососевых и осетровых. Известно несколько способов получения ДНК, которые основаны на солевой экстракции молок и последующем спиртовом осаждении. Однако ДНК, получаемая таким способом и используемая в
качестве БАД, характеризуется высокой молекулярной массой и слабой растворимостью в воде, что ограничивает сферу ее применения.
Актуальность проблемы, поставленной в данной работе, определяется необходимостью создания биодоступных препаратов ДНК из распространенных видов сырья. Использование для этой цели ферментативного гидролиза позволит регулировать не только физико-химические свойства (растворимость и вязкость, молекулярный состав) (Mahmoud, 1994), но и, возможно, биологическую активность получаемых БАД.
При ферментативном воздействии на ткань гонад гидробионтов важны определение активности и специфичности ферментов, участвующих в гидролизе нуклеопротеидов (экзогенных, входящих в состав комплексных ферментных препаратов, и эндогенных, содержащихся в молоках).
Известно, что в панкреатической ткани большинства видов животных, в том числе ракообразных, имеется широкий набор ДНКаз (Вакорина и др., 1997). Наиболее полно изученным и широко используемым ферментом этой группы является ДНКаза І (КФ 3.1.4.5), выделенная из панкреаса быка. Основной ее функцией является деградация ДНК. Имеется ряд работ по исследованию ДНКаз, выделенных из гепатопанкреаса краба (Вакорина и др., 1997; Мензорова и др., 1993; Мензорова и др., 1994), криля (Chou and Liao, 1990). ДНКазы панкреатических органов рыб являются мало изученными (Rasskazov et al., 1975).
7 В гонадах гидробионтов обнаружен ряд гидролитических ферментов,
выполняющих различные функции клеточного метаболизма. Например, из
молок чавычи (Yamomoto, 1971), скумбрии (Cordonnier and Bernardi, 1968),
кеты, минтая (Галкин и др., 1991) выделены кислые ДНКазы, различающиеся
между собой по свойствам. Спермин морского ежа S. Intermedius содержат
три разные ДНКазы: кислую и две щелочные металлозависимые (Сибирцев и
др., 2001). Как полагают многие исследователи, роль этих ферментов -
участие в апоптозе - программируемой клеточной гибели. Однако сведений о
протеолитических ферментах а также ДНКазах особенно щелочных,
содержащихся в гонадах рыб, моллюсков, иглокожих в литературе
недостаточно для выявления механизма их действия и роли в процессах
деградации ДНК.
Сравнительное изучение ферментов эндогенного и экзогенного
происхождения необходимо для обоснования технологии получения
препаратов ДНК из данного вида сырья, определения взаимосвязи между
свойствами ферментов, составом нуклеиновых кислот и биологической
активностью получаемых препаратов.
Цель исследований заключалась в разработке технологии БАД из гонад
гидробионтов на основе воздействия ферментов эндогенного и экзогенного
происхождения, а также в исследовании состава, свойств и биологической
активности полученных БАД.
8 Для достижения поставленной цели необходимо было решить
следующие основные задачи:
провести скрининг объектов по содержанию ДНК, активности эндогенных протеаз и нуклеаз в гонадах гидробионтов;
осуществить подбор рациональных параметров ферментативного гидролиза нуклеопротеидов гонад рыб и беспозвоночных;
исследовать состав и физико-химические свойства препаратов, полученных в результате ферментативного гидролиза из гонад различных видов гидробионтов;
разработать способ получения БАД из гонад гидробионтов;
разработать НД на БАД из гонад гидробионтов;
провести оценку безопасности, исследовать биологическую активность, провести клинические испытания полученных препаратов.
Научная новизна: Разработана и научно обоснована технология получения БАД из гонад гидробионтов.
Впервые проведено сравнительное исследование протео- и нуклеолитических ферментов в мужских гонадах 13 видов гидробионтов.
Проведены сравнительные кинетические исследования микробиальных, а также содержащихся в панкреатической ткани рыб, крабов ДНКаз.
Исследован состав нуклеиновых компонентов препаратов из гонад гидробионтов, полученных разными способами: ферментативным («Нуклеатин» и низкомолекулярная ДНК) и методом спиртового осаждения
9 (нуклеопротеидный комплекс).
Показано, что эндогенные ферменты являются инициаторами ферментативной деструкции нуклеиновых кислот, влияющими на конечный состав препаратов. Установлено, что при отсутствии или следовой активности ферментов эндогенного происхождения степень гидролиза нуклеопротеидов с участием экзогенных ферментов низка.
Практическая значимость. Разработан эффективный способ получения БАД, в основу которого положен ферментативный гидролиз гонад гидробионтов и фракционирование олигонуклеотидов с помощью ультрафильтрации.
Способ получения ферментативного гидролизата из молок рыб защищен
патентом №2171066 от 22.03.2000: «Продукт, обогащенный
аминокислотами и способ его получения».
По результатам экспертной оценки и санитарно-химических
исследований в федеральном центре Госсанэпиднадзора РФ «Нуклеатин»
соответствует требованиям СанПиН 2.3.2.1078-01, МУК 2.3.2.- 21-98 и
зарегистрирован как БАД (Per. удостоверение №
77.99.02.928.Б.000258.08.03).
Разработана и утверждена нормативная документация на БАД «Нуклеатин» ТУ № 9283-026-00038155-02 , ТИ№ 36-215-02.
Выпущена опытно-промышленная партия «Нуклеатина».
Проведены медико-биологические испытания «Нуклеатина» и показано,
10 что он может быть использован в качестве БАД в кардиологии,
офтальмологии, при лечении острых вирусных заболеваний, а также в
качестве радиопротекторного средства.
Апробация работы: основные положения были представлены и
доложены на научно-практической конференции «Состояние здоровья
населения Дальнего Востока. Новые медицинские технологии с
использованием биоресурсов» (Владивосток, 1999); Международном
симпозиуме «Пищевые биотехнологии: проблемы и перспективы в XXI веке»
(Владивосток, 2000); межрегиональной научно-практической конференции
«Вакцинопрофилактика. Проблемы настоящего и будущего» (Владивосток,
2000); Международной научно-практической конференции «Прибрежное
рыболовство - XXI век» (г. Южно-Сахалинск, 2001); Всероссийской
конференции молодых ученых «Рыбохозяйственная наука на пути в XXI век»
(Владивосток, 2001); Международной конференции «Морские прибрежные
экосистемы: водоросли, беспозвоночные и продукты их переработки»
(Москва, Голицино, 2002), Всероссийской конференции молодых ученых
(Мурманск, 2002).
Положения, выносимые на защиту:
сравнительная характеристика субстратной специфичности
ферментов панкреатических органов лососевых рыб,
млекопитающих, беспозвоночных, а также микроорганизмов;
влияние эндогенных ферментов (протеаз и нуклеаз) гонад
гидробионтов, являющихся инициаторами гидролиза
нуклеопротеидов, на молекулярный состав олигонуклеотидов; способ получения олигонуклеотидов из гонад гидробионтов включающий ферментативный гидролиз и разделение компонентов по молекулярным массам;
состав препаратов, получаемых методом ферментативного гидролиза из гонад гидробионтов, характеристика биологической активности. Публикации: по теме диссертации опубликовано 18 работ. Структура и объем работы. Диссертация включает введение, обзор
литературы, экспериментальную часть, заключение, выводы, список
литературы, содержащий 100 источников (в том числе 41 зарубежный).
Работа изложена на 160 страницах, содержит 11 таблиц, 15 рисунков и 8
приложений.
Благодарности. Автор выражает искреннюю признательность
научному руководителю Т.Н. Пивненко, оффициальным оппонентам Л.В.
Шульгиной, Э.Н. Киму, а также всем коллегам, оказавшим помощь в
подготовке диссертационной работы.
Биологическая активность компонентов нуклеопротеидов
В начале XX столетия были сделаны попытки раскрыть механизм действия нуклеиновых кислот. Было замечено, что разные нуклеиновые кислоты значительно различаются по физико-химическим и биологическим свойствам. В работах по изучению биологической активности РНК, выполненных под руководством В.М. Земсковой (Земскова, 1997) показано, что РНК реализует два механизма модуляции: основной и дополнительный. 4 Основной механизм сводится к интенсификации внутриклеточного метаболизма у различных нормально функционирующих клеток и к коррекции его, если он разрегулирован. Дополнительный механизм касается регулирования содержания компонентов клеток и межклеточных взаимоотношений, их активации в норме и при патологии (Беседнова, Эпштейн, 2002).
Механизм действия ДНК наиболее хорошо изучен на примере препарата «Деринат». Установлено, что ДНК проникает в клетку и активизирует репарационные процессы, однако эффективность ДНК зависит от молекулярной массы препарата. Показано, что молекулярная масса лекарственного препарата ДНК не должна превышать 500 кДа (Каплина, 2000).
Область применения препаратов ДНК довольно широка. Например, ДНК со сравнительно низкой молекулярной массой применяется в кардиологии при лечении ишемической болезни сердца (Патент РФ № 95103961), в онкологии при профилактике и лечении рака (А.С. SU 1804852), для профилактики инфекционных заболеваний (Патент РФ № 2063228). Известны работы по применению нуклеиновых кислот и их производных при радиационном поражении клеток. Эти исследования показали, что экзогенные ДНК независимо от видового происхождения, способны после проникновения внутрь облученной клетки in vitro активировать репарационные процессы (Белоус и др., 1974).
Исследование влияния ДНК, полученного из молок лососевых методом спиртового осаждения, на физическую работоспособность показало, что ежедневное употребление препарата вызывает повышение этого показателя у крыс на 37 %. Причем, активность ДНК лососевых сохраняется не только в чистом препарате, но и в пищевых продуктах с ее добавлением (Касьяненко, 1999).
Проведена оценка биологической активности препаратов ДНК из молок лососевых по влиянию на функциональное состояние человека и его высшую нервную деятельность. Оно изучалось на основании комплексного исследования, включающего в себя ряд тестов, проведенных на монозиготных близнецах (Эпштейн и др., 2002).
Как установлено в проведенных исследованиях, прием препарата снижает уровень невротизации, снижается уровень тревожности, уменьшается астеническая симптоматика, эмоциональная лабильность, избирательно улучшаются процессы памяти.
Таким образом, влияние приема препарата ДНК повышает эффективность протекания процессов высшей нервной деятельности, улучшает функционирование сосудистой системы, что создает оптимальные условия для значительного увеличения физической работоспособности человека (Эпштейн и др., 2002).
Проверка действия препаратов из молок других видов рыб (сельдь, минтай) на повышение физической работоспособности человека и животных показала отрицательный результат (Касьяненко и др., 1999).
До недавнего времени существовало представление о нуклеиновых кислотах как об иммунологически инертных молекулах. Однако имеются данные о стимуляции образования специфических антител in vivo и в культуре клеток селезенки под действием РНК и ДНК, выделенных из эукариотических клеток (Рыкова и др. 2001).
Ферментные комплексы, используемые для получения гидролизатов экспериментальная часть
Общепризнанными являются следующие основные способы осуществления гидролиза: ферментативный, кислотный и ферментативно-кислотный. Щелочной гидролиз белков используют существенно реже из-за значительной рацемизации и разрушения аминокислот и пептидов в щелочных растворах при высоких значениях рН (Неклюдов и др., 2000).
В кислотном гидролизе используют соляную или серную кислоты, подбирая время реакции в зависимости от строения белка. Очень устойчивы к гидролизу пептидные связи, образованные лейцином, изолейцином и валином. Недостатком данного метода является разрушение многих незаменимых аминокислот по причине жестких условий, окислительной деструкции подвергаются метионин, цистин, гистидин, лизин, триптофан разрушается полностью, серии и треонин до 10%, а также соединения белковой природы. Потери аминокислот, обусловленные углеводами, могут быть снижены, если работу проводят в вакууме и применяют большой избыток кислоты.
Достаточно легко протекает ферментативный гидролиз белков. Для осуществления полного гидролиза необходимо применение комбинации нескольких ферментов, что связано с высокой специфичностью протеаз (Неклюдов и др., 2000).
В ряде случаев при гидролизе коллаген- или кератинсодержащих белков, плохо растворимых в воде и обладающих большим количеством пептидных связей, не поддающихся ферментативному гидролизу (например, глицина или аланина с пролином), используют предварительный кислотный гидролиз, а после частичного или полного перевода белков в растворимое состояние осуществляют дальнейшее превращение в гидролизаты при помощи ферментных препаратов.
Существует способ получения продукта, представляющего собой ферментативный гидролизат (Патент РФ № 2055482). Продукт получен из гомогенизированных молок лососевых и осетровых рыб, используется в медицине, микробиологии, промышленности, сельском хозяйстве. Способ получения продукта включает два этапа. На первом этапе молоки гомогенизируют, доводят рН до 4,5-5,0 и проводят автолиз в течение 48-50 час при температуре 37-39С, фильтруют, жидкую фракцию инактивируют при температуре 80С в течение 30 мин. На втором этапе осадок подвергают ферментативному гидролизу в течение 24 час при 37С с последующей инактивацией фермента при 75С в течение 24 час. Жидкие фракции соединяют и сушат.
Недостатками этого метода являются: низкий выход свободных аминокислот, длительность процесса - 48 час автолиз и ферментативный гидролиз - 24 час, хранение в кислой среде, что является препятствием для последующего использования без нейтрализации.
Достоинствами ферментативного гидролиза являются: 1) его экологичность (не требует применения кислот и щелочей); 2) сохраняются многие незаменимые аминокислоты; 3) в препарате присутствуют биологически активные пептиды.
Таким образом, известны различные способы гидролиза белков, в том числе, с применением протеолитических ферментов. Однако каждый вид белкового сырья требует исследования условий проведения реакции, кинетики действия различных ферментов и других параметров. Такой сложный субстрат как нуклеопротеидный комплекс требует разработки специфических подходов к биотехнологии препаратов из гонад гидробионтов.
Исследование активности протеолитических ферментов в гонадах гидробионтов
Казеинолитическая активность, обычно рассматриваемая как общая протеолитическая, не проявлялась в условиях проведения реакций (рН 8, температура 3 7 С) в гонадах гребешка, осьминога и акулы-катрана.
Возможно, содержащиеся в них протеазы требовали других условий или отличались иной субстратной специфичностью. Из литературных данных, протеазы, содержащиеся в ядрах клеток относятся к разным классам протеолитических ферментов (гранзимы, кальпаины, сериновые протеазы) (Lambert et al., 2002; Филатов, Варфоломеева, 1990). Предположительно, основная биологическая роль этих ферментов - участие в апоптозе.
Для установления специфичности щелочных протеаз нами была определена эстеразная активность в ткани молок горбуши по субстратам, специфическим для трипсина и химотрипсина - ТАМЭ и БТЭЭ соответственно. Полученные результаты - 0,00003 мкМ/мин мг и 0,0012 мкМ/мин мг - показали, что содержащиеся в молоках ферменты не относятся к протеазам трипсинового типа. Для ферментов с высокой специфичностью к этим субстратам, например для химопсина, данный показатель составляет 17 мкМ/мин мг (для ТАМЭ).
По предположению ряда исследователей (Солдатенков и др., 1991) участие протеолитических ферментов в качестве потенциальных регуляторов функционирования нуклеаз эндогенного происхождения можно объяснить тем, что ядерные протеазы могут устранять структурное разобщение нуклеаз с ДНК в составе хроматина. Расщепляя предварительно белки, связанные с ДНК и защищающие ее от действия нуклеаз, протеазы могут таким образом создавать условия для прямого контакта ДНЗС с эндогенными нуклеазами, что способствует ее последующей деградации.
Активность щелочной Са, Mg-зависимой ДНКазы при данных условиях и концентрации гомогената молок в реакционной смеси (0,03 г/мл) в гонадах гребешка, осьминога и минтая обнаружена в следовых количествах (табл. 2). Близкие значения активности щелочных ДНКаз выявлены в молоках горбуши, трески и наваги, а также сельди, омуля и макруруса. Можно предположить наличие взаимосвязи эндогенной активности протеаз и нуклеаз, содержащихся в молоках различных видов рыб. По некоторым данным, ядерные эндонуклеазы, содержащиеся в различных органах, например в ядрах печени крыс, образуются из высокомолекулярного предшественника и активируются под действием протеиназ. Этим объясняется множественность ядерных эндонуклеаз, выделенных различными исследователями из печени крыс Rattus albinos (Лебедева и др., 1995), а также из гонад морского ежа Strongylocentrotus intermedins (Сибирцев и др.,2001). Из другого источника известно (Zhang et al., 2001), что обработка изолированных ядер специфической протеазой приводит к расщеплению гистонов и разворачиванию компактного хроматина, что способствует действию эндогенных ДНКаз на ДНК и, как следствие, повышает чувствительность ДНК к экзогенным нуклеазам.
При сопоставлении активности щелочных ДНК-аз и содержания ДНК в гонадах можно предположить взаимосвязь между этими показателями. За некоторыми исключениями (макрурус) в объектах с высокой активностью ДНК-аз наблюдалось наибольшее содержание ДНК.
Таким образом, для получения препаратов, содержащих нуклеиновые кислоты и их производные, необходимо учитывать не только общее содержание ДНК, но также состав нуклеопротеидов и активность тканевых ферментов, которые, возможно, во многом определяют содержание и состав конечных продуктов, а также влияют на скорость протекания ферментативного гидролиза.
Белково-пептидный и аминокислотный состав
При обработке свежемороженых молок горбуши в условиях, исключающих денатурацию ДНК, с применением пилорина и гепатопанкреатина получены отличные друг от друга результаты (рис. 10), в обоих случаях показывающие наличие низкомолекулярных олигонуклеотидов (от 3 до 10 нуклеотидов).
Увеличение нуклеазной активности происходило при добавлении в реакционную смесь ионов магния и кальция при их концентрации 0,005 М (рис. 10). При этом значительно увеличивалось образование нуклеотидов, содержащих от трех до пяти мономеров. Содержание высокомолекулярных фракций, десорбируемых 1 М хлоридом натрия, снижалось.
Сравнительный состав олигонуклеотидов в гидролизатах молок лососевых, полученных разными способами: 1-е применением пилорина, 2- с применением гепатопанкреатина, 3-е применением пилорина, с добавлением ионов Са , Mg III- три-, IV-тетра-, V - пентануклеотиды. Таким образом, с использованием различных ферментных препаратов, а также способов их активации можно изменять содержание и состав полинуклеотидов в конечных продуктах. 3.3.2.3 Сравнение состава олигонуклеотидов гидролизатов из молок различных видов рыб
Методом ИОХ также были исследованы гидролизаты молок других видов рыб: тунца, сельди и минтая. В качестве ферментного препарата использовали гепатопанкреатин. Молекулярный состав олигонуклеотидов молок данных видов рыб по различным параметрам отличался от состава гидролизата молок лососевых. При гидролизе молок сельди обнаружено накопление моно-, три-, тетрануклеотидов (кривая 2, рис. 11), а гидролизат тунца содержал олигонуклеотиды «среднего» размера (кривая 1, рис. 11).
Совсем иная картина при гидролизе молок минтая (кривая 3, рис. 11). Обнаружено очень малое содержание низкомолекулярных олигонуклеотидов. Практически весь нуклеотидный материал выходил после десорбции 1 М NaCl. Это могло быть связано с различным составом молок минтая, сельди, тунца и лососевых.
В исходном сырье мороженые молоки лососевых и сельди практически не различались по содержанию в них ДНК, но превышали на 28-38 % по этому показателю молоки минтая (Касьяненко и др, 1997). Кроме того, в нуклеопротеине молок лососевых и сельди присутствовали протамины, в отличие от минтая, имеющего в составе нуклеинового комплекса гистоны, которые образуют с ДНК устойчивый комплекс (Дэвидсон, 1968).
Таким образом, выявлены различия в нуклеотидном составе гидролизатов молок горбуши, сельди, тунца и минтая. Обнаружено, что в гидролизате молок тунца и лосося содержится больше олигонуклеотидов «среднего» размера, в гидролизате сельди преобладают моно-, три- и тетрануклеотиды, в гидролизате молок минтая преобладали высокомолекулярные компоненты. О -\ . 1 г 0 20 40 60 80 V, ml Рис. 11. Сравнительный состав олигонуклеотидов в гидролизатах молок различных видов рыб (1)-тунца, (2)-сельди,(3)-минтая. I- моно-, III - три-, IV - тетра-, VIII - октануклеотиды. Результаты этих исследований можно сопоставить с показателями активности эндогенных ферментов (табл. 2). Наибольшее количество низкомолекулярных продуктов нуклеиновых кислот присутствовало в препаратах, полученных из молок с высокой эндогенной активностью нуклеазных ферментов. Таким образом, степень гидролиза нуклеиновых кислот при получении ферментативных гидролизатов зависит от активности эндогенных ферментов.
Фракционный состав низкомолекулярных нуклеиновых кислот в препаратах из гонад различных видов гидробионтов
В результате разделения нуклеиновых компонентов методом гель-электрофореза и определения их молекулярной массы выявлены различия в молекулярном составе полинуклеотидов у гидролизатов и нуклеопротеидных комплексов, полученных из мужских гонад горбуши, минтая, сельди и гребешка (рис. 12). Нуклеопротеидный комплекс из молок горбуши содержал одну фракцию с молекулярной массой около 300 кДа. В нуклеопротеидном комплексе из молок сельди, минтая и гребешка обнаружено по два фрагмента. После обработки молок экзогенными нуклеазами (из гепатопанкреаса краба) ДНК сельди расщеплялась до образования олигонуклеотидов с молекулярной массой 6, 10, 16 кДа. В гидролизате молок горбуши содержались как олигонуклеотиды (6, 41, 68 кДа), так и низкомолекулярная ДНК (около 300 кДа). ДНК гребешка гидролизовалась в большей степени, чем 312 Мол. масса, кДа
Похожие диссертации на Технология биологически активных добавок к пище на основе ферментативного гидролиза гонад гидробионтов
