Введение к работе
Актуальность проблемы
Воспалительные заболевания кишечника (ВЗК), к которым относятся неспецифический язвенный колит (НЯК) и болезнь Крона (БК), представляют собой хронически текущие, рецидивирующие воспалительные заболевания желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), приводящие к необратимому нарушению его структуры и функции [Яблокова Е.А., 2006]. Рост заболеваемости у детей, поздняя диагностика, приводящая к различным осложнениям, и неблагоприятный прогноз обусловливают особую актуальность изучения данной проблемы.
Этиология ВЗК остается до конца неизвестной. Многие исследователи пришли к единому мнению, что в патогенезе воспалительных заболеваний кишечника лежит взаимодействие генетической предрасположенности, факторов внешней среды, иммунорегуляторных механизмов и кишечной микрофлоры [F. Scaldafcrri et al., 2005].
Результаты современных отечественных и зарубежных исследований указывают на значительную роль индигенной микрофлоры в патогенезе воспалительных заболеваний кишечника, в особенности его дистальных отделов. Но имеющийся объем информации об особенностях кишечной микрофлоры у пациентов с ВЗК недостаточен для глубокого понимания конкретной роли различных видов бактерий в развитии данной патологии. Это связано, в первую очередь, с несовершенством рутинных бактериологических методов исследования микрофлоры, а также недостаточным вниманием к изучению качественного и количественного состава пристеночной микрофлоры толстой кишки у пациентов с БК и НЯК. В большинстве исследований изучалась преимущественно фекальная микрофлора, которая по составу существенно отличается от микрофлоры слизистой оболочки ЖКТ [Р.В. Eckburg et al., 2005].
В последние годы развитие молекулярной систематики бактерий и методов детекции нуклеиновых кислот, таких как полимеразная цепная реакция (ПЦР) в режиме реального времени сделали возможным выявление в исследуемом материале тех групп бактерий, учет которых был крайне затруднен из-за сложности или невозможности их культивирования методами классической бактериологии. Полученные данные кардинально изменили представление о составе пристеночной микрофлоры кишечника [Matsuki Т. et al., 2002, Miyamoto Y. et al., 2002, Matsuki, T. et al., 2004].
На сегодняшний день нет единого консенсуса относительно роли микробного компонента в развитии ВЗК, состава кишечной микрофлоры у пациентов с БК и НЯК в зависимости от активности и распространенности заболевания. Все известные исследования проводились только у взрослых пациентов [Swidsinski A. et al. 2002; Eckburg Р.В. et al., 2005, Takaishi H. et al, 2008].
Изучение особенностей состава индигешюй пристеночной микрофлоры и иммунологической реактивности к ней у пациентов с НЯК и БК важно не только для понимания патогенеза ВЗК, но и необходимо для разработки новых диагностических и терапевтических подходов, оценки эффективности и безопасности новых методов лечения, что делает нашу работу крайне актуальной.
Цель исследования
Установить особенности состава пристеночной микрофлоры кишечника и адаптивного иммунитета у детей с болезнью Крона и неспецифическим язвенным колитом для оптимизации лечебно-диагностических и профилактических мероприятий.
Задачи исследования:
Выявить особенности анамнестических, клинических и лабораторно-инструментальных данных у детей с различными вариантами течения болезни Крона и неспецифического язвенного колита.
Изучить количественный и качественный состав основных представителей пристеночной микрофлоры в биоптате слизистой оболочки кишечника у детей с болезнью Крона и неспецифическим язвенным колитом методом количественного ПЦР в режиме реального времени с группоспецифическими праймерами.
Выявить корреляционные связи между количественным содержанием различных представителей индигенной микрофлоры (группа В. fragilis, группа С. leptum, группа C.coccoides, род Bifidobacterium, род Lactobacillus, род Prevotella и кластер Atopobium) при различных течениях воспалительных заболеваний кишечника у детей с клиническими и лабораторно-инструментальными данными.
Исследовать титр антител класса IgG к основным представителям индигенной микрофлоры в сыворотке крови с помощью иммуноферментного анализа у детей с болезнью Крона и неспецифическим язвенным колитом и оценить его диагностическую и прогностическую роль.
Оптимизировать лечебно-диагностические и профилактические мероприятия на основании установленных особенностей состава пристеночной микрофлоры у детей с болезнью Крона и неспецифическим язвенным колитом.
Научная новизна.
Впервые была проведена комплексная оценка пристеночной микрофлоры толстой кишки у детей с БК и НЯК методом количественного ПЦР в режиме реального времени с группоспецифическими праймерами. Выявлены особенности количественного и качественного состава пристеночной микрофлоры (группа В. fragilis, группа С. leptum, группа C.coccoides, род Bifidobacterium, род Lactobacillus, род Prevotella и кластер
Atopobium) в зависимости от нозологической формы, особенностей клинического течения, распространенности патологического процесса и проводимой терапии.
Впервые оценена иммуногенная роль индигенной флоры (на примере бифидобактерий и лактобацилл) в патогенезе воспалительных заболеваний кишечника по данным иммуноферментного анализа. Показано, что повышение уровня IgG-антител к лактобациллам и бифидобактериям коррелируют с распространенностью и активностью патологического процесса при НЯК и может быть использовано в качестве диагностического и прогностического критерия у детей с ВЗК.
Полученные результаты данного исследования могут послужить основой для дальнейшей качественной и количественной идентификации основных представителей пристеночной микрофлоры кишечника, для разработки новых диагностических критериев болезни Крона и неспецифического язвенного колита, для оптимизации методов медикаментозной терапии у детей и мониторинга их эффективности.
Практическая значимость.
Изучен состав пристеночной микрофлоры толстой кишки у детей с БК и НЯК методом количественного ПЦР в режиме реального времени с группоспецифическими праймерами в зависимости от нозологической формы, особенностей клинического течения и распространенности патологического процесса. Предложены новые дополнительные диагностические критерии у детей с БК и НЯК. Показано влияние проводимой терапии на состав пристеночной микрофлоры и роль ее изменения на течение ВЗК у детей.
Показана высокая диагностическая ценность определения титра антител класса IgG к лактобациллам и бифидобактериям в сыворотке крови у детей с болезнью Крона и неспецифическим язвенным колитом посредством иммуноферментного анализа и его прогностическая роль для определения активности течения неспецифического язвенного колита у детей.
Предложены дополнительные диагностические критерии БК и ЕЯК у детей в зависимости от состава пристеночной микрофлоры кишечника и уровня IgG-антител к лактобациллам и бифидобактериям.
Апробация работы
Основные положения диссертации доложены и обсуждены на XIV Российской Гастроэнтерологической неделе (Москва 6-8 октября 2008г), VII Российском конгрессе «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии», Москва 21-23 октября 2008 г., 11-ом Международном Славяно-балтийском научном форуме «Санкт-Петербург - Гастро-2009», Санкт-Петербург 20-22 мая 2009 г., 2-ом международном конгрессе по пробиотикам «Санкт-Петербург - Пробиотики-2009», Санкт-Петербург 28-30 октября 2009 г.
Внедрение в практику
Разработанные дополнительные микробиологические диагностические критерии БК и НЯК у детей внедрены в практику и используются в педиатрическом отделении городской детской клинической больницы № 13 имени Н.Ф. Филатова г. Москвы. Основные научные положения и выводы внедрены в педагогический процесс курса гастроэнтерологии и диетологии ФУВ кафедры детских болезней № 2 ГОУ ВПО Российский государственный медицинский университет им. Н.И. Пирогова Росздрава.
Публикации: По теме диссертации имеется 6 публикаций, в том числе 2 статьи в журналах, рекомендуемых ВАК РФ.
