Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Клинико-биофизические аспекты течения бронхиальной астмы (обзор литературы) 12
1.1. Современные представления об этиопатогенезе бронхиальной астмы с позиций биорадикального окисления 12
1.2. Изучение оксидативно-антирадикального статуса больных бронхиальной астмой 30
1.3. Возможности коррекции оксидативно-антирадикального дисбаланса 41
1.4. Заключение 42
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 43
2.1. Характеристика больных бронхиальной астмой 43
2.2. Общеклинические методы исследования 48
2.2.1. Оценка функции внешнего дыхания 48
2.2.2. Методика определения сенсибилизации 50
2.3. Исследование оксидативно-антирадикального статуса у больных бронхиальной астмой 50
2.3.1.Активированная родамином Ж хемилюминесценция 52
2.3.2. Люминолзависимая хемилюминесценция 54
2.3.3. ЭПР-спектроскопия 57
2.4 Статистическая обработка результатов исследования 61
ГЛАВА 3. Результаты собственных исследований 62
3.1. Контрольная группа 62
3.2. Динамика клинико-функциональных показателей у больных астмой до и после лечения 67
3.2.1. Динамика клинических показателей у больных бронхиальной астмой до и после лечения 67
3.2.2. Динамика функциональных показателей у больных бронхиальной астмой до и после лечения 71
3.3. Результаты исследования оксидативно-антиоксидантного статуса больных бронхиальной астмой 74
3.3.1. Результаты исследования оксидативно-антиоксидантного статуса больных бронхиальной астмой до лечения 75
3.3.2. Результаты исследования оксидативно-антиоксидантного статуса больных бронхиальной астмой после лечения 87
3.3.3 Комплексная оценка оксидативно-антиоксидантных показателей в динамике обострения до и после лечения в зависимости от тяжести течения бронхиальной астмы 98
3.4. Прогностическая значимость показателя АОА у больных бронхи альной астмой в фазе обострения 104
Заключение 105
Выводы :...121
Практические рекомендации 123
Список литературы 124
- Современные представления об этиопатогенезе бронхиальной астмы с позиций биорадикального окисления
- Изучение оксидативно-антирадикального статуса больных бронхиальной астмой
- Исследование оксидативно-антирадикального статуса у больных бронхиальной астмой
- Динамика клинико-функциональных показателей у больных астмой до и после лечения
Введение к работе
Бронхиальная астма (далее - астма) широко распространена в большинстве развитых стран мира, что обусловливает большую медицинскую и социальную значимость проблемы данного заболевания в современном обществе. Согласно результатам ряда эпидемиологических исследований распространенность астмы составляет от 2 до 25,5% в разных странах и имеет тенденцию к росту [9, 33, 51, 74, 241]. В России в настоящее время зарегистрировано около 1 млн. человек, страдающих астмой [26]. С начала шестидесятых годов в некоторых странах стало отмечаться увеличение смертности от астмы, приобретающее черты эпидемий с особенностями в каждой стране [9]. Рост заболеваемости и смертности от астмы определяет актуальность данной проблемы для современной медицинской науки.
Современная концепция патогенеза астмы складывается как из положений о классических механизмах клеточно-молекулярной организации аллергического воспаления, так и из результатов работы приоритетных научно-исследовательских программ. Классические представления о патогенезе астмы включают реакции с участием антител IgE-класса, способных фиксироваться к поверхности клеток, имеющих специфические рецепторы (тучные клетки, базофилы). Последние, секретируя различные медиаторы, активируют другие клетки: эозинофилы, моноциты, нейтрофилы, тромбоциты, лимфоциты с последующим развитием аллергического ответа, наибольшее значение в котором принадлежит эозинофилам [4, 28, 33, 161, 173, 218, 249]. Несмотря на то, что в генерализованном процессе аллергического воспаления задействованы многие клетки, именно эозинофилы воздействием провоспалительных и токсических продуктов эозинофильных гранул вызывают типичное для аллергического воспаления при астме повреждение эпи-
телиальных клеток бронхов с последующей их деструкцией и десквамацией [39].
Современные успехи в изучении патогенеза астмы связаны с развитием исследовательских программ, изучающих механизмы иммуномодуляции и ремоделирования дыхательных путей, функциональную активность рецепторов и вторичных мессенджеров в формировании бронхиальной обструкции, интерреакцию между воспалением и гладкой мускулатурой бронхиального дерева, генетическую предрасположенность при астме [77].
В различных исследованиях показано наличие тесной связи многих звеньев патогенеза астмы с биорадикальными процессами. Так, описаны механизмы участия «окислительного стресса» в стимуляции экспрессии генов, регулирующих воспалительный ответ при астме [212], реализации апоптоза клеток бронхиального эпителия [216, 236, 238]. Имеются данные о взаимодействии биорадикальных процессов и респираторной вирусной инфекции (как одного из индукторов обострения астмы) [64, 229], о влиянии экзогенных источников свободнорадикальных частиц на развитие аллергического воспаления и бронхиальной гиперреактивности [216]. Доказана роль оксидативно-антиоксидантных реакций в реализации клеточного звена патогенеза астмы: регуляции функциональной активности тучных клеток, базофилов, эозинофилов, макрофагов, нейтрофилов [28, 33, 64, ПО, 145, 183, 219, 243]. Рядом авторов показано участие «окислительного стресса» и антиоксидантной защиты (АОЗ) в нейрогуморальных механизмах иммунного воспаления и бронхиальной обструкции при астме: регуляции тонуса симпатической и парасимпатической нервной системы [64, 71, 180, 183, 188, 249], функции нехолинергической, неадренергической системы [109, 135, 136, 215, 228]. Наконец, описано влияние биорадикальных реакций на метаболический компонент патогенеза данного заболевания, в частности, на пуриновый обмен [22, 48, 77].
И если иммунное звено патогенеза астмы с развитием реакций гиперчувствительности, продукцией реагиновых антител, дегрануляциеи тучных клеток, выделением различных медиаторов с бронхоконстрикторной активностью исследовано в полном объеме, то свободнорадикальные механизмы в данном аспекте требуют дальнейшего анализа.
Рядом авторов доказано важное клиническое значение каскадных реакций свободнорадикального окисления (СРО) с последующей активацией ферментов антиоксидантной системы (АОС) в развитии особой формы аллергического воспаления при астме. Так, А.В.Никитиным и соавт., Б.Я. Варшавским и соавт., И.В. Медведевым и соавт., СВ. Лапик и соавт., D.R. Rackita, S. Kaleli et al., G. Gornica et al., J. Posterski et al., F. Gazdik et al., H. Vural et al. было выявлено увеличение уровня продуктов СРО (малонового диальдегида (МДА)), шиффовьгх оснований, диеновых коньюгатов в сыворотке и форменных элементах крови больных астмой [52, 53, 38, 49, 207, 170, 149, 205, 146, 243]. Во многих исследованиях выявлена гиперпродукция активных форм кислорода (АФК) и гидроперекисей липидов (ГПЛ) клетками крови: Д.М. Габитова и соавт., Н.И. Кубышева и соавт., I. Rahman et al., S. Teramoto et al., M. Krishna et al., W. Abraham et al., B. Haliwell et al. [23, 21, 211, 235, 176, 88, 155]. Аналогичные результаты были получены А.В. Никитиным и соавт., А.В. Емельяновым и соавт., A. Antczak et al., P. Montuchi et al., C. Olopade et al., P. Paredi et al., S. Comhair et al., L. Smith et al., I. Horvath et al. при исследовании конденсата выдыхаемого воздуха у больных астмой [52, 34, 96, 94, 192, 197, 200, 119, 227, 163]. Изменение содержания продуктов СРО в жидкости бронхоальвеолярного лаважа у пациентов с астмой было доказано В.А. Жмуровым и соавт., СВ. Лапик и соавт., В.А. Шестовицким и соавт., R. Dworski et al., W. Wu et al., D. Kaminsky et al. [30,49,81, 128,249,171].
Однако получаемые результаты исследования СРО и АОС нередко противоречивы и не позволяют сделать какой-либо однозначный вывод.
Возможно, это связано с тем, что в большинстве случаев не проводилось комплексное изучение показателей СРО и АОС. Зачастую наблюдения велись на малом контингенте больных, без определения достоверных контрольных показателей, без использования прямых методов биорадикального мониторинга; не проводилось исследование оксидативно-антиоксидантных взаимодействий в зависимости от тяжести и фазы течения астмы.
В связи с этим, перспективным является дальнейшее изучение биорадикальных особенностей контроля течения астмы в зависимости от тяжести и фазы заболевания.
Цель исследования оптимизация контроля течения астмы на основе изучения оксидативно-антиоксидантного статуса.
Задачи исследования
Изучить изменение люминолзависимой ХЛ цельной крови больных астмой в зависимости от фазы и тяжести течения заболевания.
Изучить показатели системы АОЗ сыворотки крови (суммарной антиокислительной активности (АОА), уровня антиоксидантов «первой линии защиты» церулоплазмина (ЦП) и трансферрина (ТР)) больных астмой в зависимости от фазы и тяжести течения заболевания.
Исследовать количественно степень дисбаланса оксидативно-антиоксидантных реакций в зависимости от фазы и тяжести течения астмы.
Оценить динамику люминолзависимой ХЛ цельной крови на фоне стандартной двухнедельной терапии обострения астмы в зависимости от тяжести течения заболевания и сопоставить полученные данные с клинико-функциональной динамикой.
Изучить изменения суммарного антиокислительного потенциала сыворотки крови после стандартного лечения обострения астмы в зависимости от тяжести течения и сопоставить полученные данные с кли-нико-функциональной динамикой.
Исследовать динамику оксидативно-антиоксидантного дисбаланса на фоне стандартного лечения больных астмой в фазе обострения в зависимости от тяжести течения заболевания и сопоставить полученные данные с клинико-функциональными изменениями.
Оценить прогностическую значимость исследуемых параметров для контроля течения астмы.
Научная новизна исследования
Впервые дана комплексная оценка параметров, характеризующих оксидативно-антиоксидантный статус больных астмой в различные фазы заболевания в зависимости от тяжести течения на основе двух прямых методов ЭПР и ХЛ.
Выявлен выраженный и статистически достоверный дисбаланс оксидативно-антиоксидантного статуса в фазе обострения астмы, тогда как ремиссия заболевания не сопровождается значимыми нарушениями равновесия между оксидативными и антирадикальными механизмами.
Выявлены четкие корреляции между комплексом оксидативно-антиоксидантных показателей и клинико-функциональными данными больных астмой различной тяжести течения в виде прямой зависимости между степенью выраженности дисбаланса свободнорадикальных процессов и тяжестью течения. Доказано, что при тяжелом течении заболевания отмечается значительная активация реакций СРО с одновременным снижением уровня системной АОЗ до критических значений
Исследованы оксидативно-антирадикальные параметры в динамике обострения на фоне стандартной противоастматической терапии.
Установлено, что быстро достигаемое при стационарном лечении обострения улучшение клинических показателей сопровождается еще большим усугублением имеющегося исходно дисбаланса свободнорадикальных процессов, которое более выражено у пациентов с тяжелым течением астмы.
Предложены новые критерии диагностики и прогноза заболевания у различных категорий больных астмой на основе исследования оксидатив-но-антиоксидантного статуса.
Практическая ценность работы Предложен к внедрению новый параметр контроля течения астмы легкого течения — уровень продукции АФК лейкоцитами цельной крови (ХЛ-АФК). Данный метод диагностики по своей чувствительности превосходит метод-прототип (исследование функции внешнего дыхания (ФВД)) и является высокоинформативным скрининговым тестом, который обеспечивает высокую точность и предпочтителен для практического использования. При значении уровня ХЛ-АФК 20x105 квант/сМп и более можно диагностировать фазу обострения астмы, а при значениях 19хЮ5 квант/сх4л и менее - фазу ремиссии.
Предложен к внедрению новый прогностический критерий развития обострения астмы после стационарного лечения в установленные сроки -показатель АОА сыворотки крови, регистрируемый после стандартной терапии обострения: при значении АОА от 25 отн.ед. и более следующее обострение наступит не ранее чем через 5-6 мес, при значении АОА от 24 отн.ед. до 3 отн.ед. - не ранее чем через 3-4 мес, при значении АОА от 2 отн.ед. и менее - не позднее чем через 3-4 недели.
Использование предложенных диагностических и прогностических показателей позволяет улучшить качество контроля течения астмы.
Обоснована перспектива возможного включения в стандартную медикаментозную терапию больных с тяжелым течением астмы натуральных и синтетических препаратов с антирадикальным действием, обеспечивающих коррекцию возникающих и прогрессирующих в динамике свободнора-дикальных нарушений.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту
Фаза обострения астмы сопровождается развитием оксидативно-антирадикального дисбаланса (оксидативно-антирадикальных параметров), обусловленного как активацией механизмов свободнорадикальной агрессии, так и формированием антиоксидантной недостаточности. Выраженность данных изменений прямо пропорциональна тяжести течения заболевания.
Стандартное лечение обострения астмы сопровождается положительной клинико-функциональной динамикой и нарастанием степени сво-боднорадикального дисбаланса, которое находится в прямой зависимости с тяжестью заболевания и наиболее выражено у больных с тяжелым перси-стирующим течением.
Работа выполнена на кафедре пропедевтики внутренних болезней и в ПНИЛ клинической биофизики и антиоксидантной терапии Смоленской государственной медицинской академии на базе пульмонологического отделения Смоленской областной клинической больницы, под руководством профессора кафедры, заведующей ПНИЛ, доктора медицинских наук В.Г. Подопригоровой.
Современные представления об этиопатогенезе бронхиальной астмы с позиций биорадикального окисления
Астма в последние десятилетия остается актуальной проблемой современной медицины. Ее распространенность чрезвычайно варьирует в различных странах, составляя по данным эпидемиологических исследований по вопросникам ECRHS от 2 до 25,5% [9, 33, 51, 74, 241]. Астма относится к числу заболеваний, требующих значительных прямых и непрямых затрат в рамках государственного здравоохранения, так как значительно снижает качество жизни и трудоспособность больных. По данным международных эпидемиологических исследований в России должно быть около 7 млн. человек, страдающих астмой, в то время как официально зарегистрировано лишь около 1 млн. [1, 13, 14, 26, 73], причем основная масса представлена тяжелыми инвалидизирующими формами заболевания [40].
В основе патогенеза астмы лежит хроническое аллергическое воспаление слизистой оболочки бронхов с участием разнообразных клеточных элементов (тучных клеток, базофилов, эозинофилов, нейтрофилов, лимфоцитов, макрофагов) [3, 4, 25, 67, 159]. Специфическим выражением формирования и персистирования данного типа воспаления является гиперреактивность бронхов (ГРБ) - развитие чрезмерной неадекватной бронхоконст-рикторной реакции на различные раздражители [28, 71]. При этом повышенная чувствительность к раздражающему воздействию сопровождается нарастанием тяжести бронхиальной обструкции [230]. ГРБ — облигатный признак астмы, выраженность которого коррелирует с тяжестью течения заболевания [71].
В настоящее время в изучении патогенеза астмы достигнуты существенные успехи. Значимый прогресс в данной области связан с развитием исследовательских программ по таким вопросам, как интерреакция между воспалением и гладкой мускулатурой бронхиального дерева, участие ней-ропептидов в функции и дисфункции дыхательной системы, функциональная активность рецепторов и вторичных мессенджеров в формировании бронхиальной обструкции, механизмы иммуномодуляции и ремоделирова-ния дыхательных путей, генетическая предрасположенность при астме [77].
В последние годы особый интерес вызывает изучение роли биорадикальных процессов (системы оксиданты-антиоксиданты) в формировании и персистировании патологического процесса при данном заболевании. И если иммунное звено патогенеза астмы изучено достаточно полно, то механизмы СРО в аспекте данной патологии требуют дальнейшего анализа [144].
Основные представления о свободнорадикальных процессах в жидкой фазе сформулированы академиком Н.М.Эмануэлем (1975-1987). Теоретические основы данных явлений хорошо изучены и представлены в работах отечественных и зарубежных ученых [19, 44, 185]. СРО представляет собой цепной радикальный механизм, включающий инициирование, продолжение, разветвление и обрыв цепи окисления с образованием свободных радикалов токсичных интермедиатов - альдегидов, кетонов и др. [224]. Принципиальные особенности биорадикального окисления липидов заключены именно в механизме инициирования [44]. Большое значение в инициирова-нии цепи придается ион-радикалу кислорода [77, 183] и ионам железа (Fe ) [147, 232, 239]. Результатом избыточного инициирования СРО является развитие химической модификации ДНК, карбонильной модификации белков и пероксидации липидов. СРО непрерывно протекает в норме во всех тканях живых организмов (в том числе и в респираторном тракте) и являет ся одним из вариантов нормального метаболизма [116, 240]. Однако под влиянием различных патологических факторов генерация АФК усиливается, возрастает активность СРО и реализуется мембраноповреждающее действие свободных радикалов [59]. Для поддержания стационарного уровня радикальных реакций в процессе эволюции сформировались антиокислительные механизмы, объединяемые в системы АОЗ организма, функционирование которых достаточно хорошо изучено [104, 175]. Естественные ан-тиоксиданты делятся на внутриклеточные (супероксиддисмутаза, каталаза, пероксидаза, глутатион, аскорбиновая кислота), мембранные (альфа-токоферол, бета-каротин, убихинон) и внеклеточные (ЦП, ТР, лактоферрин, альбумин, гаптоглобин, аскорбиновая кислота, мочевая кислота, альфа-токоферол) [60]. При нормальных условиях в организме свободнорадикаль-ные процессы и механизмы АОЗ сбалансированы и функционируют по принципу обратной связи, формируя основу оксидативно-антирадикального равновесия [59]. Влияние патологического фактора обусловливает развитие системного дисбаланса СРО и АОЗ, формирующего «окислительный стресс» и играющего значимую роль в патогенезе различных заболеваний [60], в том числе и астмы [135, 144, 170].
Этиопатогенетические механизмы астмы могут включать наследственно обусловленную предрасположенность (преимущественно при атопи-ческом варианте) [29, 69] и воздействие факторов окружающей среды (респираторная вирусная инфекция, промышленные поллютанты) [65, 68, 144].
Изучение оксидативно-антирадикального статуса больных бронхиальной астмой
Несмотря на отсутствие общепринятой радикальной концепции патогенеза астмы, большинство исследователей склоняется к наличию прямой корреляционной связи между показателями СРО и степенью выраженности аллергического воспаления, синдрома ГРБ и тяжестью течения заболевания [155,203,243,248].
Наиболее распространенным объектом для изучения свободноради-кальных параметров у больных астмой является кровь. Так, при исследовании 77 больных смешанной астмой среднетяжелого течения обоего пола А. В. Никитиным и соавт. было выявлено двукратное увеличение содержания вторичных и конечных продуктов СРО - МДА и шиффовых оснований в сыворотке крови (по сравнению с контролем) с последующим достоверным снижением этих показателей на фоне стандартной терапии и нормализацией их при комбинированном лечении с добавлением ингаляций газообразного супероксида [52]. G .Gornica et al. при изучении свободнорадикального статуса 23 больных астмой в фазе обострения показали повышение уровня МДА в плазме на 115% в сравнении с контрольной группой, a J. Posterski et al. выявили менее выраженное, но аналогичное изменение содержания МДА в плазме относительно контроля на примере 24 пациентов с тяжелой астмой [149, 205]. Сходные результаты относительно концентрации МДА в плазме были получены F. Gazdik et al. в исследовании 56 больных астмой обоего пола, причем уровень МДА был прямо пропоционален содержанию эозинофильного катионного протеина (биологически активного белка эози-нофильных гранул) [146]. С. Calabres et al. определили обратно пропоцио-нальную корреляционную зависимость между повышенной концентрацией МДА в плазме и значением объема форсированного выдоха за первую секунду (ОФВі), что позволило авторам предложить использовать данный биохимический критерий для оценки степени бронхиальной обструкции при астме [114]. Б. Я. Варшавский и соавт. выявили двенадцатикратное увеличение уровня МДА в плазме крови у 40 больных смешанной астмой в фазе обострения по сравнению со здоровыми, в то время как в эритроцитах имело место уменьшение концентрации данного метаболита [53]. Напротив, в исследовании D. Rackita было показано повышение содержание МДА в эритроцитах, прямо пропоциональное нарастанию степени тяжести заболевания (исследовано 193 больных обоего пола) [207]. S. Kaleli et al. подтвердили эти результаты: при исследовании 25 некурящих пациентов мужского пола с эндогенной астмой среднетяжелого течения было выявлено двукратное увеличение уровня МДА в эритроцитах и последующее снижение данного показателя на фоне стандартной противоастматической терапии, более выраженное при добавлении в схему лечения монтелукаста [170]. Изучение В.А. Медведевым и соавт. продуктов СРО в нейтрофилах периферической крови у 36 больных астмой доказало умеренное повышение уровня диеновых коньюгатов и МДА, тогда как показатель шиффовых оснований досто верно не отличался от контроля [38]. Аналогичные результаты были получены СВ. Лапик и соавт. при исследовании 60 пациентов с контролируемой и неконтролируемой неатопической астмой различного течения, причем наиболее выраженная активизация процессов СРО отмечалась при неконтролируемой астме (независимо от тяжести течения) [49]. Н. Vural et al. у 38 больных астмой (без учета степени тяжести) выявили значительное (в 2 раза) увеличение уровня МДА в лейкоцитах крови в сравнении с контрольной группой, что позволило авторам сделать вывод о важной роли данной популяции клеток в интенсификации реакций СРО в воспалительном ответе при астме [243]. L. Wood et al. выявили повышенное содержание в плазме F2-изопростанов, которые также относятся к группе вторичных продуктов СРО, образующихся при метаболизме простагландина серии F2 [248]. Уровень данных метаболитов у пациентов с астмой прямо пропоционально коррелировал с тяжестью течения заболевания.
Активное применение в изучении процессов генерации АФК и СРО находят методики хемилюминесцентного исследования крови и ее форменных элементов, результаты которых также не всегда однозначны. Данные многих авторов свидетельствуют в пользу гиперпродукции АФК и ГПЛ клетками крови в реализации аллергического воспаления при астме [12, 21, 23, 87, 204, 211]. Так, Д.М. Габитова и соавт. при исследовании 70 больных астмой различной степени тяжести, используя методики железозависимой хемилюминесценции (ХЛ) плазмы крови и спонтанной люминолзависимой ХЛ цельной крови, выявили достоверное повышение показателей свето-суммы свечения плазмы и фагоцитирующих клеток крови по сравнению с контрольной группой [23]. Причем интенсивность ХЛ крови возрастала пропорционально степени тяжести астмы и уменьшалась с увеличением продолжительности заболевания. Аналогичную корреляционную связь между уровнем ХЛ гранулоцитов, плазмы крови и течением астмы показали в своем исследовании Н.И Кубышева и соавт. (87 больных астмой) [21]. Полученный ими коэффициент К, определяемый соотношением уровня свечения клеток в инкубации с аутоплазмой к ХЛ собственно гранулоцитов, был предложен в качестве критерия диагностики и прогнозирования обострения астмы. Гиперпродукция АФК при астме была доказана также в исследованиях I. Rahman et al., S. Teramoto et al., M. Krishna et al., W. Abraham et al., B. Haliwell [211, 235, 176, 88, 155].
Исследование оксидативно-антирадикального статуса у больных бронхиальной астмой
Определение сенсибилизации к различным аллергенам было проведено у 87 больных астмой методом постановки скарификационных кожных тестов.
На расстоянии 3-5 см проводились пробы с тест-контрольной жидкостью, гистамином и стандартными водно-солевыми экстрактами аллергенов.
Кожное тестирование осуществлялось с использованием стандартных серийных аллергенов, содержащих 10000 единиц белкового азота (PNU) в 1 мл, изготовленных из домашней пыли, шерсти животных, пыльцы растений, пищевых продуктов. Методика постановки кожных тестов соответствовала общепринятой: скарификатором наносились царапины на внутренней поверхности предплечья, отступив 5 см от лучезапястного сустава [27].
Интерпретация полученных результатов скарификационных кожных тестов проводилась в соответствии со стандартными требованиями и представлена в таблице 2.
Оксидативно-антирадикальный статус оценивался в проблемной научно-исследовательской лаборатории клинической биофизики и антиокси-дантной терапии Смоленской государственной медицинской академии (заведующая лабораторией - доктор медицинских наук профессор В.Г. Подо-пригорова) с использованием двух прямых методов контроля - ХЛ и ЭПР. ХЛ - один из двух прямых методов определения свободнорадикаль-ных показателей [44, 72, 191, 225]. Он основан на выявлении спонтанного непрерывного свечения тканей и биосред, которое, как правило, коррелирует с уровнем окислительных процессов в биологических средах [191, 220, 242].
Измерение спонтанного сверхслабого свечения осуществляется хеми-люминометрами, в которых в качестве детектора слабых световых потоков служит фотоэлектронный умножитель [31]. Границы обнаружения различных веществ с помощью ХЛ находятся в пределах 10_9-10-16 моль/л, что во много раз превышает чувствительность радиоиммунологических методов. ХЛ реакции- высокочувствительны, так как позволяют обнаружить 1СГ10 — 10 п радикалов в 1 мл. ХЛ - скрининговый метод, предпочтительный для клинического исследования состояния свободнорадикальных процессов в организме при различной патологии [46, 61, 106, 191]. ХЛ обеспечивает высокую точность и может использоваться как экспресс-метод для выявления действия повреждающих факторов.
В клинической практике нашла применение методика оценки ГПЛ и АОА биологических проб с помощью регистрации активированной родамином Ж ХЛ в присутствии двухвалентного железа [20, 79]. Отмечено, что эта методика позволяет оценивать скорость процессов СРО [61] При этом родамин Ж (синтетический краситель) хорошо растворим в воде и при длительном хранении в течение года не теряет активизирующей способности для ХЛ. Родамин Ж можно считать специфическим зондом свободных радикалов [20, 45].
Исследование ГПЛ и АОА выполнялось на хемилюминометре BRR-02. Измерение проводилось при 37С и постоянном перемешивании механической мешалкой. Для изучения динамики ГПЛ и АОА в качестве контроля использовали суспензию желточных липопротеидов (ЖЛП). ЖЛП получали путем разведения желтка куриного яйца 1:10 дистиллированной водой. В кювету помещали суспензию ЖЛП в объеме 0,5 мл, содержащую 5 мг фосфолипидов, 0,1 мл 1мМ раствора родамина Ж, доводили, объем до 5,6 мл фосфатным буфером (25 мМ КН2РО4) с рН = 7,7, затем в систему добавляли 0,1 мл дистиллированной воды. Для инициирования ХЛ вводили 0,5 мл 25 мМ раствора FeS04.
Динамика клинико-функциональных показателей у больных астмой до и после лечения
Клиническая эффективность проводимой терапии оценивалась по результатам опроса больных. В частности, фиксировались следующие показатели: частота симптомов (ЧС) астмы (приступов экспираторного удушья, кашля) в неделю, частота ночных симптомов (ЧНС) астмы (приступов экспираторного удушья, кашля) в неделю, длительность симптомов (ДС) астмы (приступов экспираторного удушья, кашля) до полного купирования в минутах.
Средние значения клинических показателей больных астмой в фазе обострения и их изменение после стационарного лечения показаны в таблице 8. Различия между исследуемыми клиническими параметрами до и после стандартного стационарного лечения в рекомендуемые сроки были достоверны для всех подгрупп больных астмой (р 0,001). Таким образом, после окончания стационарного лечения у большинства пациентов отмечалась положительная клиническая динамика (выраженность которой варьировала в зависимости от тяжести течения заболевания) в виде уменьшения ЧС, ЧНС и ДС.
Более наглядно изменение ЧС астмы в различных клинических группах больных после стационарного лечения представлено на рисунке 5. Исходный уровень ЧС при обострении астмы повышается прямо пропорционально нарастанию тяжести течения заболевания, и максимальное значение выявляется при ТПТ. Уменьшение ЧС на фоне стандартной противовоспалительной терапии также наиболее выражено при обострении астмы ТПТ (на 98% в сравнении с исходным), а наименее - при ЛПТ (на 78% в сравнении с исходным), что, вероятно, обусловлено относительно высокими значениями этого клинического показателя при тяжелой астме и лучшим ответом пациентов данной группы на проводимое лечение.
До лечения по мере нарастания тяжести течения ДС астмы увеличивается, при сравнении ЛПТ и ТПТ - в 2 раза (с 11 до 22 минут). На фоне проводимой в стационаре стандартной терапии значение данного показателя снижается, наиболее выраженно при ТПТ заболевания (на 64% в сравнении с исходным), что отражает эффективность получаемого лечения. Причем следует отметить, что при обострении ЛПТ астмы значение данного показателя после стационарного лечения снижется до уровня ремиссии.
В заключение следует отметить, что после стандартной терапии в условиях стационара в рекомендуемые сроки (две недели) практически у всех больных выявлялась положительная клиническая динамика в виде уменьшения показателей ЧС, ЧНС и ДС.
Оценка функциональных показателей у больных астмой включала исследование ФВД с определением показателей ОФВь МОС75, МОС5о, МОС25 до и после стандартного лечения в стационарных условиях в рекомендуемые сроки. Динамика показателей ФВД у больных астмой после лечения представлена в таблице 9. Таблица 9. Динамика показателей ФВД у больных астмой до и после
Как видно из представленной диаграммы, у больных астмой с ЛПТ в фазе обострения отмечается статистически достоверное уменьшение исследуемых параметров ФВД в сравнении с фазой ремиссии. После стационарного лечения отмечается лишь тенденция к улучшению данных показателей, которая, однако, не является статистически значимой (р 0,05).
На рисунке 9 показано, что у больных астмой СПТ после стационарного лечения выявляется статистически достоверная динамика в виде улучшения исследуемых показателей ФВД (р 0,05 для ОФВі и МОС75; р 0,001 для МОС5о и МОС25).
Данные представленной на рисуне 10 диаграммы показывают некоторую тенденцию к улучшению изучаемых параметров ФВД у больных астмой ТПТ после стационарного лечения, которая не является статистически значимой, за исключением показателя МОС50 (р 0,05).
Таким образом, анализ полученных данных не выявил статистически достоверных различий показателей ФВД до и после стационарного лечения при ЛПТ (р 0,05 для всех категорий сравнения), что возможно обусловлено соответствием исходных значений исследуемых параметров границам нормы. Аналогичное отсутствие значимой динамики на фоне стационарного лечения отмечалось и в клинической группе больных с ТПТ астмы (лишь сравнение значений МОС50 выявляло незначительное, но статистически достоверное его увеличение (р 0,05)), что объясняется, вероятно, противоположными причинами: нарушение параметров ФВД слишком значительно и не может быть нивелировано за столь короткий срок наблюдения. Напротив, при исследовании пациентов с СПТ выявлялась умеренно выраженная и статистически достоверная положительная динамика всех представленных показателей ФВД до и после лечения (р 0,05 при сравнении значений ОФВь МОС75 и р 0,001 при сравнении значений МОС5о, МОС25).
Оксидативно-антиоксидантный статус изучался с помощью двух прямых методов контроля радикальных процессов — ХЛ и ЭПР. Для определения оксидативного статуса исследовались показатели ХЛ-АФК и ХЛ-ГПЛ, для определения антиоксидантного статуса исследовались показатели АОА, ЦП, ТР, АОС ЦП/ТР. Изучаемые параметры у больных с обстрением астмы регистрировались дважды: до и после стационарного лечения в рекомендуемые сроки.
